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正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義： 

多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶，可產(chǎn)生降解反應(yīng)，可使原化學(xué)物質(zhì)變?yōu)榈投镜幕驘o(wú)毒的物質(zhì)從體內(nèi)排出；還可產(chǎn)生激活反應(yīng)，可使原化學(xué)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有親電子性質(zhì)，導(dǎo)致毒性增強(qiáng)，成為致突變物或終致癌物。近年來(lái)對(duì)混合功能氧化酶系與外源性化學(xué)物質(zhì)相互作用的深入研究，對(duì)于從分子生物學(xué)水平上進(jìn)一步了解外源性化學(xué)物質(zhì)的毒作用具有重要意義。

測(cè)定原理：

MFO催化對(duì)硝基苯甲醚產(chǎn)生對(duì)硝基在400nm下有特征吸光值。

自備用品：

酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水、氯仿。

試劑組成和配制：

提取液：液體120mL×1瓶，4℃保存;

試劑一：液體24mL×1瓶，4℃避光保存;

試劑二：粉劑×3管，-20℃保存；臨用前取一管加入1.5mL水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑三：液體24mL×1瓶，4℃保存;

試劑四：液體64mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提?。?/strong>

按照組織質(zhì)量（g）：提取液（mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm。

2、在EP管中依次加入如下試劑

分別加入1000μL氯仿，充分混勻萃取，靜置10min，取下層氯仿層0.6mL至新的EP管中。再加入試劑四0.6mL，充分混勻萃取，取上層水相0.2mL于96孔板中，400nm下測(cè)定吸光值A(chǔ)測(cè)定與A空白，△A=A測(cè)定-A空白?？瞻坠苤恍铚y(cè)一管。

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