微囊藻素- ADDA檢測(cè)試劑盒
概述
這個(gè)Abraxis微囊藻素 ELISA 檢測(cè)試劑盒適用于定量檢測(cè)水樣中微囊藻素和節(jié)球藻素的含量。在樣品處理的時(shí)候不需要濃縮。如果必要的話陽性樣品可以通過HPLC或其他的傳統(tǒng)的方法來驗(yàn)證。
微囊藻素- ADDA檢測(cè)試劑盒安全性說明
底物溶液包含有TMB,終止液含有稀硫酸。要避免皮膚和底物溶液、終止液接觸。如果不小心接觸的話請(qǐng)用清水沖洗。
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性
這個(gè)Abraxis 微囊藻素 ELISA 檢測(cè)試劑盒應(yīng)該置于4–8°C保存。在使用前要提前拿出來回復(fù)到室溫(20-25°C)。在有效期內(nèi)都可以使用。
原理
這個(gè)Abraxis微囊藻素- ADDA 檢測(cè)試劑盒的原理是直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫反應(yīng)。通過一種特異性抗體來識(shí)別檢測(cè)微囊藻素和節(jié)球藻素。當(dāng)樣品中還有囊藻素和節(jié)球藻素及其類似物時(shí),那么它們將會(huì)與固定在微孔低的微囊藻素-蛋白類似物競(jìng)爭(zhēng)和溶液中的微囊藻素抗體結(jié)合。經(jīng)過一個(gè)洗滌步驟后加入HRP標(biāo)記的二抗反應(yīng)。再加入無色底物,產(chǎn)生了一個(gè)顏色反應(yīng)。加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色;在450nm波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè),樣品中的微囊藻素濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。
微囊藻素- ADDA檢測(cè)試劑盒試劑盒的局限性和可能的交叉反應(yīng)
對(duì)在水樣中經(jīng)常出現(xiàn)的多種有機(jī)物和無機(jī)物已近作過檢測(cè)對(duì)此試劑盒并無干擾。由于化合物的易變質(zhì)性由基質(zhì)反應(yīng)引起的干擾是不可能*避免的。操作不當(dāng)可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤,比如:試劑盒保存條件不對(duì)、錯(cuò)誤的加液順序、試劑的量沒有加準(zhǔn)確、孵育的時(shí)間太長(zhǎng)或太短、孵育的溫度太高或太低。操作過程不易在強(qiáng)光下進(jìn)行。和其它檢測(cè)方法一樣對(duì)陽性結(jié)果要求通過其它傳統(tǒng)的方法來驗(yàn)證。
重要性
世界上大多數(shù)人都依賴表面水,因?yàn)楸砻嫠侵饕娘嬘盟?。飲用水工業(yè)面臨著表面水污染的威脅,這將導(dǎo)致人類的安全問題。藍(lán)綠藻屬(Cyanobacteria,Blue-green Algae)分泌產(chǎn)生的藍(lán)藻毒素是目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的污染范圍zui廣,研究zui多的一類藻毒素。目前已從不同微囊藻菌株中分離、鑒定了60多種微囊藻毒素結(jié)構(gòu)。目前已知存在的zui普遍、含量相對(duì)較多,毒性較大的是主要是MC-LR,MC-RR,MC-YR等數(shù)種, 其中的微囊藻毒素LR (Microcystin-LR)是目前已知的毒性、急性危害zui大的一種淡水藍(lán)藻毒素。于未及時(shí)地檢測(cè)水質(zhì)情況的污染變化及采取相應(yīng)的控制措施,致使這些毒素富集于魚類或貝類中并通過食物鏈傳遞,直接存在于飲用水或用水中,嚴(yán)重威脅人類的健康,已經(jīng)發(fā)生了多起有關(guān)藻毒素中毒并引起死亡的事故。近年來淡水藻類污染已成為一個(gè)性的環(huán)境問題。
性能數(shù)據(jù)
敏感性:檢測(cè)限0.10 ppb (ng/L)
重復(fù)性:標(biāo)準(zhǔn)的變異系數(shù)(CVs) <10%;樣品的異系數(shù)(CVs) <15%
選擇性:這個(gè)檢測(cè)方法對(duì)于藍(lán)綠藻病毒環(huán)狀多肽類似物展現(xiàn)出非常好的交叉性
樣品:一個(gè)樣品相關(guān)性試驗(yàn)被做顯示出良好的相關(guān)性(用ELISA 和PAA分別測(cè)定)。
A 試劑盒組成
1、96孔酶標(biāo)板:1塊(12×8條),包被有結(jié)合了蛋白的微囊藻毒素的類似物。
2、標(biāo)準(zhǔn)溶液和對(duì)照: 標(biāo)準(zhǔn)6瓶,濃度分別為0, 0.15, 0.40, 1.0, 2.0, 5.0 ppb,對(duì)照1瓶濃度為0.75 ppb
3、抗體溶液
4、抗-羊-HRP酶標(biāo)記物
5、洗液 5X Concentrate,
6、底物顯色液(TMB)
7、終止液
8、使用說明書
9、稀釋液:用于稀釋樣品(樣品濃度大于5 ppb時(shí))
B 測(cè)試前準(zhǔn)備
微量移液器和吸頭是必須使用的,推薦使用排槍加液這樣可以確保整個(gè)微孔板上的孔在每個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間趨于一致。在做同一次測(cè)試時(shí)要使用同一個(gè)盒子里的試劑和標(biāo)準(zhǔn)。在操作前仔細(xì)閱讀說明書。
1、使用前將所有的試劑拿到室溫(19℃-25℃)。
2、從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條,放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。置于4-8℃保存。
3、標(biāo)準(zhǔn)液,對(duì)照,抗體溶液,酶結(jié)合物,底物,終止液不用稀釋直接使用。
4、洗液在使用前要以1:5的比例稀釋后使用(100 mL 5X 洗液加 400 mL 無離子水)
5、由于終止液中包含稀硫酸拿的時(shí)候要小心。
C.操作步驟
1、在對(duì)應(yīng)的微孔中加入50μL的標(biāo)準(zhǔn)溶液、對(duì)照或樣品(推薦做2-3個(gè)重復(fù))。
2、每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL抗體溶液,用封口膜把微孔板蓋上,輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。在室溫孵育90分鐘。
3、孵育完成后,將微孔中的溶液用力地倒入水槽中,用1 X的洗液洗板3次,每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板,去掉殘留的洗液。
4、每孔加入100 μL的酶結(jié)合物溶液,用封口膜把微孔板蓋上,輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。在室溫孵育30分鐘。
5、孵育完成后,將微孔中的溶液用力地倒入水槽中,用1 X的洗液洗板3次,每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板,去掉殘留的洗液。
6、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL的底物顯色液。室溫孵育20-30分鐘,此步驟避免太陽光照射。
7、每個(gè)測(cè)試孔加入50μL終止液。
8、在450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值(OD)(在加入終止液15分鐘內(nèi)完成)
微囊藻素- ADDA檢測(cè)試劑盒D 結(jié)果分析
結(jié)果分析可以利用商業(yè)ELISA分析軟件(4-parameters,Logit/Log or alternatively point to point)。手工計(jì)算可以先計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值的平均值,然后計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0(用其它標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值除以零標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值乘以100%)。以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0做Y軸,以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的微囊藻素的濃度做X軸構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過利用標(biāo)準(zhǔn)曲線,把對(duì)照和樣品的%B/B0代入標(biāo)準(zhǔn)可以計(jì)算出樣品中微囊藻素的濃度。樣品中微囊藻素的含量小于0.10 ppb認(rèn)為陰性。當(dāng)樣品中微囊藻素的含量大于5.0 ppb要稀釋后再測(cè)定。陽性對(duì)照測(cè)定的范圍在真實(shí)值的±25%范圍內(nèi)波動(dòng)。
微囊藻素- ADDA檢測(cè)試劑盒E 劑盒未提供的材料
1、50-250ul的移液器及吸頭.
2、50-250ul八道移液器及吸頭。
3、450nm的酶標(biāo)儀
4、洗板機(jī)(可選)
5、震蕩器(可選)
F. 工作計(jì)劃
Std0-Sd6: 標(biāo)準(zhǔn)
PC (陽性對(duì)照 0.75 ppb
Sample1, Sample2, Sample3, etc.: Samples
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
A | Std0 | Std0 | Sample1 | Sample2 |
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B | Std1 | Std1 | Sample2 | Sample2 |
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C | Std2 | Std2 | etc |
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D | Std3 | Std3 | etc |
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E | Std4 | Sam4 |
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F | Std5 | Sam5 |
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G | Std6 | Sam6 |
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H | PC | PC |
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