REAGEN™ 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒
RND99033
1.概述
REAGEN™ 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒是用于腎臟、肝臟、肌肉(牛肉、雞肉和豬肉)、細(xì)胞裂解液、血、尿、牛奶中卡那霉素殘留的定量檢測。該試劑盒有以下特點(diǎn):
- 快速(10-40分鐘),多種樣品的非有機(jī)溶劑的提取方法,高回收率(>80%)。
- 高靈敏度(0.2ppb)。
- 高重復(fù)性。
- 快速的ELISA檢測方法(不考慮樣本量的前提下只需不到1小時(shí))。
2.試劑盒原理
REAGEN™ 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應(yīng)原理,抗原已經(jīng)包被于微孔板上。分析時(shí),樣品、酶標(biāo)物以及抗體加入孔中,如果樣品中含有藥物,會與微孔板上的抗原競爭抗體,同時(shí)酶標(biāo)物與抗體結(jié)合。加入TMB底物,底物的顏色顯色強(qiáng)度與樣品中毒素的含量成反比。
3.試劑盒組成
已包被抗原的酶標(biāo)板(Kanamycin-coated Plate)(可拆式) 1×96孔
標(biāo)準(zhǔn)液(Standards)(0,0.2,0.6,1.8,5.4,16.2ppb) 6×1.0mL
高標(biāo)液1000ppb(Spiking) 1×1.0mL
一抗(Antibody #1) 1×6.0mL
HRP酶標(biāo)二抗(HRP-Conjugated Ab#2) 1×6.0mL
10×樣品稀釋液(10×Sample diluent) 1×15mL
20×濃縮洗液(Wash Solution) 1×28mL
TMB底物(TMB Substrate) 1×12mL
終止液(Stop Buffer) 1×12mL
10×樣品提取液(10×Sample Ext. Buffer)(可選) 1×15mL
樣品平衡液(Sample Balance buffer) 1×2.0mL
本試劑盒應(yīng)當(dāng)在2-8℃的溫度下儲存,有效期為一年。如果超過1個(gè)月不使用試劑盒,請
將標(biāo)品、一抗和二抗放置-20℃或者冰凍保存。
4.檢測限
檢測物質(zhì) | 檢測下限(ng/g) |
魚/蝦/肉類/肝/腎 | 8 |
細(xì)胞裂解液 | 2 |
血/尿 | 5 |
牛奶 | 2 |
5.交叉反應(yīng)
交叉反應(yīng)物質(zhì) | 交叉反應(yīng)率(%) |
卡那霉素(Kanamycin ) | 100 |
鏈霉素(Streptomycin) | < 0.1 |
雙氫鏈霉素(Dihydrostreptomycin) | < 0.1 |
新霉素(Neomycin) | < 0.1 |
6.未提供的設(shè)備或材料
- 酶標(biāo)儀
- 組織勻漿器
- 漩渦振蕩器
- 移液器(10、20和100mL,1mL各一支)
- 多道移液器(50-300mL)
7.注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)前請閱讀以下文字,以保證獲得佳實(shí)驗(yàn)效果。
- 標(biāo)準(zhǔn)品中含有卡那霉素,請小心使用。
- 不要使用過期的試劑盒。
- 不同批次的試劑盒不要混用,抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。
- 盡量保持室溫20-25℃,避免在通風(fēng)口操作防止溫度過低,過熱或者蒸發(fā)。同樣的,不
要在陽光直射下實(shí)驗(yàn),防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間,如果工作臺溫度過低,應(yīng)該鋪墊若干紙巾或者其他物料。
- 水質(zhì)量很重要,確保使用蒸餾或者去離子水。
- 加入樣品或者試劑到空的微孔板時(shí),吸嘴靠于微孔接近底部,并保持接觸。
- 孵育時(shí)間的計(jì)算越規(guī)范越好,保持添加標(biāo)準(zhǔn)品的一致性,先添加標(biāo)準(zhǔn)品后添加樣品。
- 從低濃度到高濃度地添加標(biāo)準(zhǔn)品,降低影響標(biāo)準(zhǔn)品曲線質(zhì)量的風(fēng)險(xiǎn)。
- 將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中,冷藏保存。
8.樣品的準(zhǔn)備
確保樣品的正確保存,一般來說,樣品在2-4只能保存1-2天,如果要保存更長時(shí)間,就要保存在-20冷凍保存,在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內(nèi)解凍。
- 準(zhǔn)備1×樣品稀釋液:
1體積 10×樣品稀釋液加9體積蒸餾水稀釋。
- 準(zhǔn)備1×樣品提取液:
1體積10×樣品提取液加9體積蒸餾水稀釋。
細(xì)胞裂解液
- 取100mL細(xì)胞裂解液,加900mL 1×樣品稀釋液,混勻;
- 離心5分鐘,4000×g;
- 每孔取50mL上清液來檢測。
稀釋倍數(shù):10
魚/蝦肉/肝/腎
- 稱取 1.0 g 勻漿樣品,加 4mL的1×樣品提取液;
- 渦流振蕩1分鐘;離心5分鐘,4000×g;
- 取200mL上清液到干凈的新管中,加入1.375mL 1×樣品稀釋液和25mL樣品平衡液,渦流混勻30秒。
- 每孔取50mL上清液來檢測。
稀釋倍數(shù):40
血清/尿
- 取50mL樣品,加1.2mL 1×樣品稀釋液,混勻;
- 離心5分鐘,4000×g;
- 每孔取50mL上清液來檢測。
稀釋倍數(shù):25
鮮奶
- 取100mL鮮奶到一干凈離心管,加900mL 1×樣品稀釋液;
- 漩渦震蕩30秒;
- 在4,000 x g離心10分鐘;
- 每孔取50mL上清液來檢測。
稀釋倍數(shù):10
9.檢測步驟
注意:試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時(shí),確定在使用前閱讀過注意事項(xiàng)。準(zhǔn)備適量的檢測用試劑,所有的試劑搖勻后使用。準(zhǔn)備足夠所有小管所需的用量,不能將試劑倒回原來的瓶子中,處理試劑時(shí)建議用廢棄的瓶子以降低污染的風(fēng)險(xiǎn)。
- 1x洗液的制備
1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合。
檢測
以下為計(jì)算份量的表格,用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。
試劑 | 每個(gè)反應(yīng)需要的體積 | 24次反應(yīng)的體積 |
一抗 | 50 mL | 1.2mL |
酶標(biāo)二抗 | 50 mL | 1.2mL |
工作洗液 | 1 mL | 24 mL |
終止液 | 100 mL | 2.4mL |
底物 | 100 mL | 2.4mL |
- 加入50mL的標(biāo)準(zhǔn)品于所設(shè)定的孔中;
- 加入50mL的樣品于所設(shè)定的孔中;
- 按順序在每孔中加入50mL HRP酶標(biāo)二抗和50mL一抗,輕敲微孔板邊緣混勻30秒;
- 室溫(22.5±2.5)°C避光孵育30分鐘;
- 洗板4次,每次應(yīng)該加入250mL 1×洗液,一次使板盡量甩干并在吸水紙上拍干;
- 加入100mL的TMB底物;計(jì)時(shí),輕敲微孔板邊緣混勻30秒;
- 在室溫(22.5±2.5)°C避光孵育15分鐘,加入100mL的終止液終止反應(yīng);
- 在450nm下讀OD值 (讀數(shù)前,用無絨布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。
10.結(jié)果計(jì)算
- 分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。
相對吸光度值 (%) = (標(biāo)準(zhǔn)或樣品吸光度值/零標(biāo)準(zhǔn)吸光度值) ´ 100
- 以相對吸光度值為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
- 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取質(zhì)控和樣品的濃度值。
以下曲線圖是卡那霉素酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒典型標(biāo)準(zhǔn)曲線


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