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注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

類黃酮是一類多苯化合物，屬于植物次生代謝物，對(duì)人體具有消炎，抗菌，降血脂，清除體內(nèi)羥自由基，預(yù)防癌癥等作用。

測(cè)定原理

在堿性亞硝酸鹽溶液中，類黃酮與鋁離子形成在510nm處有特征吸收峰的紅色絡(luò)合物，測(cè)定樣品提取液在510nm處的吸光值，即可計(jì)算樣品類黃酮含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：60%乙醇，自備。

試劑一：液體1mL×1管，4℃保存。

試劑二：液體1mL×1管，4℃保存。

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。

類黃酮提取

將樣本烘干至恒重，粉碎，過(guò)40目篩之后，稱取約0.02g，加入2mL提取液，60℃振蕩提取2h，10000g，25℃，離心10min，取上清待測(cè)。

測(cè)定操作表

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至510nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 操作表

類黃酮含量計(jì)算公式

1. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 5.02x+0.0007，R2 = 0.9996  

類黃酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02÷(W÷V樣總)= 0.398×（ΔA -0.0007）÷W

V樣總：加入提取液體積，2.5mL； V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.108mL； W：樣品質(zhì)量，g

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.51x+0.0007，R2 = 0.9996

類黃酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷2.51÷(W÷V樣總)= 0.797×（ΔA -0.0007）÷W

V樣總：加入提取液體積，2mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.108mL；W：樣品質(zhì)量，g

檢出限為10µg/g。

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