標題：AF 546 ConA，Alexa Fluor 546標記伴刀豆球蛋白A

【參數(shù)信息】

英文名稱：AF 546 ConA；Alexa Fluor 546 Concanavalin A

中文名稱：Alexa Fluor 546標記伴刀豆球蛋白A；AF546-伴刀豆球蛋白A

激發(fā)波長：556 nm

發(fā)射波長：573 nm

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】

AF 546 ConA（Alexa Fluor 546 Concanavalin A）是一種熒光標記的凝集素復合物，廣泛應用于生物醫(yī)學研究中的細胞標記和成像領域。

AF 546 ConA是由Concanavalin A蛋白與Alexa Fluor 546染料通過共價偶聯(lián)形成的復合物。其中：

ConA部分：是一種四聚體凝集素，分子量約104 kDa，特異性結合α-D-甘露糖（α-D-mannose）和α-D-葡萄糖（α-D-glucose）殘基，常見于細胞表面的糖蛋白和糖脂。

Alexa Fluor 546部分：是一種橙紅色熒光染料，激發(fā)波長（Ex）為556 nm，發(fā)射波長（Em）為573 nm，適用于TRITC濾光片系統(tǒng)，其量子產率高且光穩(wěn)定性優(yōu)異。

【使用方法】

（一）使用條件

儲存條件：

AF 546 ConA應儲存在-20°C、干燥、避光的環(huán)境中，避免反復凍融。建議將溶液分裝為單次使用的小份以保持穩(wěn)定性。

緩沖液要求：

ConA的結合活性依賴二價陽離子，使用時需在緩沖液中添加1 mM CaCl2和1 mM MnCl2以維持其糖結合特異性。常用緩沖液為PBS（pH 7.4）或HEPES緩沖液（pH 7.5）。

工作濃度：

對于活細胞或固定細胞染色，推薦起始濃度為5–10 μg/mL，具體需根據(jù)細胞類型和實驗目標優(yōu)化。免疫組化應用時濃度可能需調整至50–200 μg/mL。

光譜特性：

Alexa Fluor 546的激發(fā)/發(fā)射峰約為556/570 nm，適用于配備532 nm或561 nm激光器的熒光顯微鏡或流式細胞儀。需注意避免與其他熒光染料（如FITC/AF488）的光譜重疊。

（二）實驗步驟（通用流程）

以下步驟基于熒光標記ConA的典型細胞染色協(xié)議：

樣本準備：

細胞固定：用3.7%甲醛或4%多聚甲醛室溫固定20分鐘，PBS沖洗2次。

透化處理（如需胞內標記）：使用0.1% Triton X-100處理5分鐘，PBS沖洗。

封閉：用4% BSA或血清封閉20–60分鐘，降低非特異性結合。

探針孵育：

將AF 546 ConA用含Ca2?/Mn2?的緩沖液稀釋至工作濃度（如5–10 μg/mL）。

滴加至樣本上，室溫或4°C避光孵育30分鐘至2小時（時間需優(yōu)化）。

清洗：

用PBS或HEPES緩沖液沖洗3次，每次5–10分鐘，去除未結合探針。

成像與分析：

使用TRITC/Cy3濾光片組觀察熒光信號。

可搭配核染色劑（如DAPI）進行多色成像。

（三）注意事項

對照設置：建議設置未染色樣本及競爭抑制對照（如添加α-甘露糖）以驗證特異性。

光保護：操作全程需避光，防止熒光淬滅。

適用性：該探針主要用于標記細胞表面α-甘露糖/葡萄糖結構（如糖蛋白、糖萼），適用于真菌、哺乳動物細胞的研究。

【相關試劑】

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。