【參數(shù)信息】（細(xì)胞標(biāo)記探針Bodi Fluor 488酸）
英文名稱：Bodi Fluor 488 acid
中文名稱：Bodi Fluor 488酸
CAS NO：126250-42-8
分子量：292.09
溶劑：DMSO
激發(fā)波長(zhǎng)（nm）：504
發(fā)射波長(zhǎng)（nm）：510
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】（細(xì)胞標(biāo)記探針Bodi Fluor 488酸）
The excitation and emission spectra of Bodi Fluor 488 are similar. Bodi Fluor 488 is a neutral molecule, and pH has little effect on its fluorescence.
Bodi Fluor 488 has bright fluorescence and good light resistance. It is often used as a tracer molecule for intracellular fluorescent imaging. As long as its carrier is permeable to cells, the conjugate of Bodi Fluor 488 is permeable to cells.
Bodi Fluor 488 has been used for developing fluorescent intracellular tracers.
Bodi Fluor 488的激發(fā)和發(fā)射光光譜相似，Bodi Fluor 488是中性分子，pH對(duì)它產(chǎn)生熒光影響很小。
Bodi Fluor 488熒光很亮，并且耐光性好，常作為細(xì)胞內(nèi)熒光顯像的示蹤分子，只要其載體具有細(xì)胞滲透性，Bodi Fluor 488偶聯(lián)物就具有細(xì)胞滲透性。
Bodi Fluor 488 已用于開發(fā)熒光細(xì)胞內(nèi)示蹤劑。
【具體使用方法】
（1）細(xì)胞標(biāo)記（以中性脂滴為例）
母液配制：
將 BODIPY 488 粉末溶于 無水乙醇或 DMSO，配制成 1–5 mM 儲(chǔ)存液，避光保存于 -20℃。
細(xì)胞染色步驟：
貼壁細(xì)胞：
細(xì)胞密度達(dá) 50–60% 匯合時(shí)，棄培養(yǎng)基，用預(yù)熱的 PBS 清洗 2 次。
加入 含染料的培養(yǎng)基（工作濃度通常為 1–10 μM），避光孵育 10–30 分鐘。
懸浮細(xì)胞：
用緩沖液（不含 BSA/血清）重懸細(xì)胞至密度 1×10?/mL。
將 2×染料溶液（用相同緩沖液配制）與細(xì)胞懸液等體積混合，最終染料濃度為 1×，渦旋混勻后避光孵育。
洗滌與成像：
孵育后棄染料，用 PBS 清洗 2–3 次去除殘留染料。
直接進(jìn)行熒光成像（活細(xì)胞）或固定后成像（固定細(xì)胞）。
注意：
濃度需根據(jù)細(xì)胞類型優(yōu)化（建議梯度測(cè)試，如 1–20 μM）。
固定細(xì)胞時(shí)避免使用含甲醇的固定劑（破壞肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)）。
（2）蛋白/抗體標(biāo)記方法
標(biāo)記前處理：
蛋白需溶解于 PBS（pH 7.4） ，濃度建議 ≥2.5 mg/mL（低于此濃度會(huì)降低標(biāo)記效率）。
標(biāo)記步驟：
按 染料:蛋白 = 10:1 至 20:1（摩爾比）加入 BODIPY 488 NHS ester（需用 DMF 溶解至 13.65 mM）。
輕輕混勻，避光條件下 37℃ 孵育 30 分鐘。
終止與純化：
（可選）加入 1 M Tris-HCl (pH 8.7) 終止反應(yīng)（每 100 μg 蛋白加 10 μL）。
用超濾柱（如 G-25）或透析去除游離染料，純化標(biāo)記產(chǎn)物。
保存：
標(biāo)記后蛋白加入 1% BSA 或 50% 甘油，-20℃ 避光保存可穩(wěn)定半年。
（3）特殊應(yīng)用場(chǎng)景
凋亡檢測(cè)（Annexin V 偶聯(lián)物）：
用 Annexin-binding buffer 重懸細(xì)胞（1×10?/mL），加入 5 μL Andy Fluor 488 Annexin V，避光孵育 15 分鐘后流式檢測(cè)。
細(xì)胞增殖檢測(cè)（EdU 法）：
用 10 μM EdU 孵育細(xì)胞 2 小時(shí)，固定后通過點(diǎn)擊反應(yīng)與 BODIPY 488 疊氮化物偶聯(lián)。
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