鉤端螺旋體（Leptospira）試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法）使用說明書
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷
本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人鉤端螺旋體（Leptospira）的含量。

有效期：6個(gè)月

保存條件：2-8℃

[實(shí)驗(yàn)原理]

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人鉤端螺旋體（Leptospira）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人鉤端螺旋體（Leptospira）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

[樣本處理及要求]

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.  組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織*碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注：標(biāo)本溶血會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

[需要而未提供的試劑和器材]

1.酶標(biāo)儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾水或去離子水

[試劑盒組成]

編輯搜圖

健侖生物

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鉤端螺旋體（Leptospira）簡(jiǎn)稱鉤體，種類很多，可分為致病性鉤體及非致病性鉤體兩大類。致病性鉤體能引起人及動(dòng)物的鉤端螺旋體病，簡(jiǎn)稱鉤體病，是在世界各地都廣泛流行的一種人畜共患病，中國(guó)絕大多數(shù)地區(qū)都有不同程度的流行，尤以南方各省嚴(yán)重，對(duì)人民健康危害很大，是中國(guó)重點(diǎn)防治的傳染病之一。

防治措施

第一，避免犬與帶菌動(dòng)物(尤其是豬與鼠類)及被其尿所污染的水，飼料接觸。被污染的環(huán)境，可用2～5%漂白粉溶液，或2%*，或3%來蘇兒消毒。

第二，驅(qū)鼠、滅鼠。

第三，嚴(yán)禁飼喂病畜肉及帶菌動(dòng)物的生肉及其他產(chǎn)品。

第四，對(duì)較大的犬群每年進(jìn)行1次檢疫，發(fā)現(xiàn)病犬及可疑感染犬，應(yīng)及時(shí)隔離。青*素、鏈*素對(duì)本病有很好的療效，尤其在早期應(yīng)用，效果更好。但必須連續(xù)治療3～5天，才能起到消除腎臟內(nèi)鉤端螺旋體的作用。

第五，采取藥物預(yù)防。我國(guó)尚無犬用鉤端螺旋體菌苗，國(guó)內(nèi)外有與其他疫苗結(jié)合的多聯(lián)苗，可給犬預(yù)防接種，但菌苗必須包括當(dāng)?shù)刂饕餍芯?。如無菌苗，可在流行期間采用藥物預(yù)防，即在飼料中加入土*素(每千克飼料加入土*素0.75～1.5克)或四環(huán)素(按1～1.5毫克/千克體重)，連喂7天，可控制犬的感染。

第六，飼養(yǎng)病犬的人員，不要再與健犬接觸 。

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