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禽呼腸孤抗體檢測試劑盒的操作規(guī)程

來源：廣州健侖生物科技有限公司   2025年09月11日 17:11  
　　禽呼腸孤病毒被認為與病毒性關節(jié)炎、發(fā)育遲緩綜合征、呼吸系統疾病、腸熱病、吸收障礙綜合癥和骨質疏松有關，從未發(fā)病的雞中也可分離到呼腸孤病毒，根據宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同，病毒誘發(fā)疾病的的性質、癥狀和嚴重程度也不同，雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個雞群的免疫狀況可用ELISA方法進行監(jiān)測。本公司的禽呼腸孤抗體檢測試劑盒可用來檢測雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體。
 
　　禽呼腸孤抗體檢測試劑盒的操作說明，如下所示：
 
　
 
　　【試驗原理】
 
　　禽呼腸孤病毒被認為與病毒性關節(jié)炎、發(fā)育遲緩綜合征、呼吸系統疾病、腸熱病、吸收障礙綜合癥和骨質疏松有關，從未發(fā)病的雞中也可分離到呼腸孤病毒，根據宿主日齡、毒力和接觸病毒途徑的不同，病毒誘發(fā)疾病的的性質、癥狀和嚴重程度也不同，雞血清中的禽呼腸孤病毒抗體水平及整個雞群的免疫狀況可用ELISA方法進行監(jiān)測。
 
　　將滅活的抗原包被在微孔板上，加入稀釋后的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗體將與微孔板上的REO抗原結合并形成REO抗原-抗體復合物，然后洗掉未結合的物質，加入堿性磷酸酶標記的抗雞的IgG(結合物)至微孔板中，結合物將與REO抗原-抗體復合物結合，孵育后洗掉未結合的結合物，加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶發(fā)生反應形成黃色的物質。zui后，終止反應，將顏色固定。顏色的深淺可用酶標儀(405-410nm)測定。
 
　　【結果判定及EU單位說明】
 
　　REO ELISA 值                        說明
 
　　小于10EUs                            REO抗體為陰性
 
　　10-25 EUs                            REO抗體為弱陽性，應被認為經過免疫或暴露于REO，油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
 
　　25-75 EUs                             REO抗體適度陽性
 
　　>75 EUs                              REO抗體強陽性
 
　　【操作步驟】
 
　　1. 將試劑回溫至室溫，通過顛倒和渦旋將試劑混勻。
 
　　2. 將1份4×樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中，充分混勻，例如，30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
 
　　3. 將1份20×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中，充分混勻，例如，25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
 
　　4. 稀釋前將陽性對照、陰性對照和樣品震蕩均勻。
 
　　5. 陽性對照、陰性對照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl ：800μl。將移液器調到100μl，反復吹打4次使之充分混勻。
 
　　6. 將稀釋后的陰性對照、陽性對照分別加入微孔中，每種做兩個平行，每孔100μl；將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中，室溫下靜置30分鐘。
 
　　7. 棄去微孔板中溶液，每孔加入300μl洗滌液洗滌，重復洗滌2次，在洗滌過程中防止酶標板變干。
 
　　8. 每孔立即加入100μl結合物，室溫靜置30分鐘。
 
　　9. 重復步驟7進行洗板。
 
　　10. 每孔立即加入100μl底物，室溫靜置30分鐘。
 
　　11. 不要倒掉板內液體，每孔立即加入100μl終止液。
 
　　12. 用酶標儀雙波讀數(405nm或410nm作為主要波長，630nm或650nm為參考波長)，計算結果。

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