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 液體樣本甘油含量試劑說明書-齊一生物試劑盒篇
 液體樣本甘油含量酶法測定試劑盒       
 
 
 液體樣本甘油含量試劑說明書-齊一生物試劑盒篇描述：甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能夠水解血
液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素
敏感脂肪分解酶能夠水解脂肪細胞中的甘油三酯。 與游離脂
肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測指標(biāo)，
但檢測更加方便。 本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法與經(jīng)典的
GPO-Trinder 酶學(xué)反應(yīng)方法，通過比色測定液體樣本中的甘
油含量。經(jīng)過優(yōu)化后，操作步驟更加簡單，檢測線性范圍在
10-1200µ mol/L，可靠性和重復(fù)性俱佳，適合生物醫(yī)學(xué)、食
品實驗室檢測。 
 
原理： 在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油，
再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生*； 在過氧化物酶作用
下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正
比。 
 
適用范圍：測定血液、細胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘
油濃度。 
 
組成  ：       
(1)  R1 試劑  40 ml 
(2)  R2 試劑  10 ml           
(3)  4 mmol/L甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml 
4 ºC，儲存 3 月。   
 
所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721、722 型可見光分光
光度計。工作波長 550nm，如無此波長建議優(yōu)先選用
570nm、次選 530、490nm。 
 
 液體樣本甘油含量試劑說明書-齊一生物試劑盒篇一 樣本處理： 
1.  酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進行測定，如超過
線性范圍可用蒸餾水或鹽水稀釋后再進行測定。 
2.  培養(yǎng)液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細胞培養(yǎng)基，
如有細胞碎片應(yīng) 4ºC,， 12,000g 離心 5min,取上清進行測
定。 
3.  血液：對于新鮮抗凝血而言，可 4ºC，2,000g離心5min
得到血漿；而對于非抗凝血來說，可先 4ºC 靜置 2h 得
到血清后，2000g離心10min,除去血細胞。將得到的血
漿/血清 70ºC  加熱 10 分鐘滅活內(nèi)源脂肪酶，12,000g
離心 10min ,去上清進行測定或-20ºC 保存。 
 
二 工作溶液配制：按4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與1 ml 試
劑 R2 混合即可， 立即使用或4ºC 保存<1 天，變色棄去。  
 
三  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用蒸餾水、鹽水或與樣品緩沖液一致
的液體，將 4 mM 甘油標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋為 1000、500、
250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µ mol/L，通常
取其中 4~6 管即可，注意設(shè)置0 濃度對照反應(yīng)管。 
 
四 甘油濃度測定： 
1.  參見下表進行加樣。為使反應(yīng)時間盡量一致，減小實驗
誤差，可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣品，然后再加入工作溶
液。（注意：當(dāng)甘油濃度較低時，可將待測樣品與工作
溶液按照 100µl:100µl 體積進行混合，然后再進行測定，
但是如果樣品體積超過 100µl時將會稀釋工作液中酶
的濃度，致使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過
線性范圍的時候，可進行適當(dāng)稀釋，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)
來計算樣品中甘油濃度。） 
2.  37ºC 或25ºC 反應(yīng)  10 分鐘。 反應(yīng)平衡后顏色在 60 分鐘
內(nèi)穩(wěn)定。 
3.  先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測定各管 OD
值。 
4.  繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算甘油濃度。 
附 Excel 作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管 OD 值為 y軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃
度為 x 軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊做圖向?qū)?，選
擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點圖上的某一
點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-
和-R2
值-。 
 
 
表一： 
  酶標(biāo)微板測定的加樣比例（檢測范圍 10-1200µmol/L） 
            （可對樣品和工作液比例進行微量調(diào)整） 
 
  低濃度甘油樣品測定  高濃度甘油樣品測定 
  空白管 標(biāo)準(zhǔn)品 樣本管  空白管  標(biāo)準(zhǔn)品  樣本管 
蒸餾水 µl  50      5     
標(biāo)準(zhǔn)品 µl    50      5   
樣品 µl      50      5 
工作液 µl  150  150  150  195  195  195 
 
 
表二： 
1 ml 比色杯測定的加樣比例（檢測范圍 10-1200µmol/L）  
 
  低濃度甘油樣品測定  高濃度甘油樣品測定 
  空白管 標(biāo)準(zhǔn)品 樣本管  空白管  標(biāo)準(zhǔn)品  樣本管 
蒸餾水 µl  200      50     
標(biāo)準(zhǔn)品 µl    200      50   
樣品 µl      200      50 
工作液 µl  600  600  600  750  750  750 
 
  
說明： 
1. 維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫
蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。 
2. 正常血清甘油濃度為20-130µ mol/L，細胞培養(yǎng)時須用不含酚
紅的無色無血清培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中含有酚紅，可以選擇
含有酚紅的無細胞培養(yǎng)基作為對照進行測定。