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一、概述
顆粒性抗原（細(xì)菌、螺旋體、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)的抗體血清混合后，在電解質(zhì)參與下，經(jīng)過一定時(shí)間，抗原抗體凝聚成肉眼可見的凝集塊，這種現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng)。血清中的抗體稱為凝集素（Agglutinin），抗原稱為凝集原（Agglutinogen）。
細(xì)菌或其他凝集原都帶有相同的電荷（陰電荷），在懸液中相互排斥而呈均勻的分散狀態(tài)。抗原與抗體相遇后，由于抗原和抗體分子表面存在著相互對(duì)應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)，因而發(fā)生特異性結(jié)合，成為抗原抗體復(fù)合物。由于抗原與抗體結(jié)合，降低了抗原分子間的靜電排斥力，抗原表面的親水基團(tuán)減少，由親水狀態(tài)變?yōu)槭杷疇顟B(tài)，此時(shí)已有凝集的趨向，在電解質(zhì)（如生理鹽水）參與下，由于離子的作用，中和了抗原抗體復(fù)合物外面的大部分電荷，使之失去了彼此間的靜電排斥力，分子間相互吸引，凝集成大的絮片或顆粒。出現(xiàn)了肉眼可見的凝集反應(yīng)。
一般細(xì)菌凝集均為菌體凝集（O凝集），抗原凝集呈顆粒狀。有鞭毛的細(xì)菌如果在制備抗原時(shí)鞭毛未被破壞（鞭毛抗原在56℃時(shí)即被破壞），則反應(yīng)出現(xiàn)鞭毛凝集（H凝集），鞭毛凝集時(shí)呈絮狀凝塊。
二、玻片凝集反應(yīng)
玻片凝集反應(yīng)一般用于未知細(xì)菌的定性，所以又稱為定性凝集反應(yīng)。實(shí)踐中常用于新分離的大腸桿菌和沙門氏菌的鑒定和分型。反過來，也可用已知的細(xì)菌抗原去鑒定未知抗體，如雞白痢沙門氏菌病的清群就是采用已知雞白痢菌抗原去檢測雞白痢抗體。
（一）材料與試劑
載玻片、已知抗血清、待測細(xì)菌等。
（二）操作方法
取潔凈載玻片一張，用鉑金耳釣取已知診斷血清1滴置于載玻片一端，另端置生理鹽水1滴做對(duì)照。然后用鉑金耳釣取被檢細(xì)菌少許，置生理鹽水滴中研磨混勻，再將鉑金耳滅菌后冷卻，釣取被檢菌少許置于血清滴中研磨混勻。
（三）結(jié)果判定
在1min～3min內(nèi)，血清滴出現(xiàn)明顯可見的凝集塊，液體變?yōu)橥该?，鹽水對(duì)照滴仍均勻混濁，即為凝集反應(yīng)陽性，說明被檢菌與已知診斷血清是相對(duì)應(yīng)的。注意如環(huán)境溫度過低，則可將玻片背面與手背輕輕摩擦或在酒精燈火焰上空拖幾次，以提高反應(yīng)溫度，促進(jìn)結(jié)果出現(xiàn)。
三、試管凝集反應(yīng)
（一）材料與試劑
以布氏桿菌病試管凝集反應(yīng)為例。
1、試管（1cm×8cm）、試管架、恒溫箱、吸管等。
2、布氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、布氏桿菌試管凝集用抗原。
3、布氏桿菌病待檢血清。
4、0.5%石炭酸生理鹽水。
（二）操作方法
1、試管4支，另取對(duì)照管3支，共7支試管，置于試管架上。如檢多份血清，則對(duì)照只需做一份。
2、按表4-1加入0.5%石炭酸生理鹽水，另用1ml的刻度吸管吸取0.2ml待檢血清加入*試管中。反復(fù)吹吸5次混勻。
3、以第1試管中吸取1.50ml棄之，再吸取0.50ml加入第2試管中，第1試管尚剩0.50ml。按第1管的辦法吹吸混勻第2管，再從第2管吸取0.50ml放入第3管，以此類推，將第4管混勻后，棄去0.50ml。第5管只加0.5%石炭酸生理鹽水0.50ml，第6管加1︰25稀釋的布氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，第7管加1︰25稀釋的布氏桿菌病標(biāo)準(zhǔn)陰性血清0.50ml。
4、將購買的布氏桿菌凝集抗原以0.5%石炭酸生理鹽水做1︰20稀釋，使每ml含菌為8億，每管加0.50ml。
5、全部加畢后，一起振搖，混勻，放入37℃度溫箱12h～14h，取出后至室溫2h～4h，觀察并記錄結(jié)果。
（三）結(jié)果判定
結(jié)果用“+"表示反應(yīng)強(qiáng)度。
++++：液體*透明，菌體*被凝集呈傘狀沉于管底。
+++：液體透明，菌體基本被凝集沉于管底。
++：液體不甚透明，管底有明顯的凝集沉淀。
+：液體透明度不明顯或不透明，有不明顯的沉淀或有沉淀的痕跡。
—：液體不透明，呈均勻混濁，管底無凝集。有時(shí)有少量菌體集中于管底中心，呈臍狀，但振搖時(shí)，立即散開呈均勻渾濁。以出現(xiàn)“++"的zui高血清稀釋倍數(shù)即為該份血清的效價(jià)，又叫凝集價(jià)。大動(dòng)物（馬，牛，駱駝等）以凝集價(jià)1︰100以上判為陽性，1︰50的凝集價(jià)判為可疑。中小動(dòng)物（豬，羊，狗等）以凝集價(jià)1︰50以上判為陽性，1︰25的凝集價(jià)判為可疑。如對(duì)照管不符合要求時(shí)，試管須廢棄重做。
（四）注意事項(xiàng)
1、結(jié)果為可疑時(shí)，隔2～3周后采血重做。陽性畜群，重檢時(shí)仍為可疑，可判陽性。對(duì)同群中既無臨床癥狀又無凝集反應(yīng)陽性者，馬、豬重檢仍為可疑者，判陰性，牛、羊血清重檢仍為可疑者，可判為陽性，或以補(bǔ)反等核對(duì)。
2、對(duì)陰性畜群，初檢為可疑，復(fù)檢仍為可疑（即效價(jià)不升高者），為慎重起見，可進(jìn)行補(bǔ)反或細(xì)菌分離，如補(bǔ)反和細(xì)菌分離均為陰性者，可判為陰性。
3、化驗(yàn)結(jié)果通知畜主時(shí)，必須注明凝集價(jià)。
4、凝集反應(yīng)用的血清必須新鮮，過度溶血的血清也不好。用0.5%石炭酸防腐的血清，也在15日內(nèi)檢測完。
5、在試管凝集反應(yīng)中，抗原抗體的比例是非常重要的，必須進(jìn)行摸索，特別是在新建立一項(xiàng)試管凝集反應(yīng)時(shí)，如抗體比例過大，即稀釋倍數(shù)較小，可出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象，即在“++++"的前幾管可出現(xiàn)“—"或低于“++++"的反應(yīng)強(qiáng)度，這種現(xiàn)象就叫前帶現(xiàn)象。如進(jìn)行馬流產(chǎn)傷寒沙門氏血清試管凝集反應(yīng)時(shí)，就可能出現(xiàn)這種前帶現(xiàn)象。