測(cè)定意義
硝酸還原酶(NiR)是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶,廣泛存在于微生物及植物體內(nèi),是自然界氮循環(huán)過(guò)程中的關(guān)鍵酶,可以將亞硝酸鹽降解為 NO 或 NH3,從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累,降低因亞硝酸鹽累積而造成的對(duì)生物體的毒害作用。
測(cè)定原理
亞硝酸還原酶可將 NO2—還原為 NO,使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的 NO2—減少,即 540nm 處吸光值的變化可反應(yīng)亞硝酸還原酶的活性。
需自備的儀器和用品
天平、研缽、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿
酶液提取
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);然后 10000g,4℃離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定操作表
見詳細(xì)說(shuō)明書
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