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測(cè)定意義

錳過(guò)氧化物酶（EC1.11.1.13）是一種含亞鐵血紅素的過(guò)氧化物酶，主要存在于擔(dān)子菌中，屬于木質(zhì)素降解酶系，能有效的降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物，疊氮化合物、DTT，多環(huán)芳烴等。

測(cè)定原理

錳過(guò)氧化物酶在Mn2+存在的條件下，將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚，在465nm有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀、甲苯。

試劑組成和配制                 

試劑一：液體12mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體2mL×1支，4℃保存。

試劑三：液體4mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體2mL×1支，4℃保存。                         

樣品處理

新鮮土樣風(fēng)干，過(guò)30-50目篩。

測(cè)定操作

酶活計(jì)算公式

1. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

S-MnP活性（nmol/d /g 土樣）= ×V反總÷W÷T= 66.4×△A÷W

ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h

2. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

S-MnP活性（nmol/d /g土樣）= ×V反總÷W÷T= 132.8×△A÷W

ε：愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù)：12100L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，3h

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