抗體、重組蛋白等純化過(guò)程中，除去蛋白A親和和陰離子交換外，另一最重要的層析介質(zhì)就是陽(yáng)離子交換層析介質(zhì)。陽(yáng)離子交換層析介質(zhì)通常用在純化中的精純步驟，以去除HCP等痕量雜質(zhì)。隨著現(xiàn)代研發(fā)人員對(duì)產(chǎn)品純化的高要求，使用者對(duì)填料提出了高載量和回收率，兼具高選擇性的要求。在這種背景下，百林科通過(guò)不斷努力創(chuàng)新，研發(fā)出了具有高載量高分辨率的陽(yáng)離子交換層析介質(zhì)-- MaXtar® S HC。
MaXtar® S HC是一款高載量高分辨率的強(qiáng)陽(yáng)離子交換層析介質(zhì)，利用不同分子在特定條件下電荷性質(zhì)和多少的差異對(duì)其進(jìn)行分離。
相比于傳統(tǒng)的強(qiáng)陽(yáng)離子交換層析介質(zhì)，MaXtar® S HC表現(xiàn)出更優(yōu)的性能：
(1)改良的MaXtar基架具有更強(qiáng)剛性，因此在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率。
(2)通過(guò)升級(jí)配基偶聯(lián)方式，在保證分離效果的同時(shí)，兼具高動(dòng)態(tài)結(jié)合載量。
參數(shù)介紹
* 結(jié)合載量的測(cè)量條件：4.7ml 預(yù)裝柱，裝柱高度：10cm，在保留時(shí)間為5分鐘時(shí)測(cè)量10% 穿透時(shí)的動(dòng)態(tài)結(jié)合能力。測(cè)試緩沖液：50mM 醋酸鈉，pH 5.5(單克隆抗體)。
** 層析介質(zhì)在40℃，pH2-14環(huán)境下放置7天后，其理化性質(zhì)和功能沒(méi)有明顯變化。
*** v/v，體積比。
性能表現(xiàn)--高載量
采用CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體(精純后蛋白)作為樣品，對(duì)MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR的DBC(動(dòng)態(tài)結(jié)合載量)進(jìn)行探索，發(fā)現(xiàn)：MaXtar® S HC的DBC明顯優(yōu)于MaXtar® SP HR，是其的2倍。實(shí)驗(yàn)條件如下：
層析柱：4.7 ml預(yù)裝柱，裝柱高度10 cm，柱體積約4.7 ml
樣品：CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體(精純后蛋白)
平衡緩沖液：50mM醋酸鈉，pH5.5
洗脫緩沖液：50mM醋酸鈉，1M氯化鈉，pH5.5
保留時(shí)間：5 min
圖1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR 10%穿透(QB10)曲線
表1. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR在QB10的動(dòng)態(tài)結(jié)合力
性能表現(xiàn)--高回收率
我們采用0.8的安全系數(shù)，進(jìn)行上樣洗脫測(cè)試，發(fā)現(xiàn)：兩款填料的洗脫回收率都可以達(dá)到97%以上。實(shí)驗(yàn)條件如下：
層析柱：4.7 ml預(yù)裝柱，裝柱高度10 cm，柱體積約4.7 ml
樣品：CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體(精純后蛋白)
平衡緩沖液：50mM醋酸鈉，pH5.5
洗脫緩沖液：50mM醋酸鈉，1M氯化鈉，pH5.5
保留時(shí)間：5 min
圖2. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR的結(jié)合洗脫圖譜
表2. MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR的純化結(jié)果
DMSO耐受--適用于ADC精純
MaXtar® S HC浸泡15%DMSO，200 h后，對(duì)浸泡前后的DBC(動(dòng)態(tài)結(jié)合載量)和檢測(cè)過(guò)程中的壓力進(jìn)行對(duì)比，DMSO浸泡后MaXtar® S HC的DBC滿足浸泡前的95%以上，同時(shí)，浸泡前后壓力值均在可接受范圍內(nèi)，無(wú)明顯壓力上升情況。綜上所述，MaXtar® S HC層析介質(zhì)在15%DMSO溶液中200h穩(wěn)定。
圖3. MaXtar® S HC DMSO浸泡前/后10% 穿透(QB10)曲線
表3. MaXtar® S HC DMSO浸泡前/后在QB10的動(dòng)態(tài)結(jié)合力
圖4. MaXtar® S HC檢測(cè)過(guò)程壓力曲線
應(yīng)用案例
依據(jù)單抗料液實(shí)際載量的80%進(jìn)行上樣洗脫測(cè)試，發(fā)現(xiàn)：MaXtar® S HC純化后樣品純度達(dá)99.4%，收率為92.6%，HCP去除效果明顯。實(shí)驗(yàn)條件如下：
層析柱：4.7 ml預(yù)裝柱，裝柱高度10 cm，柱體積約4.7 ml
樣品：陰離子交換層析介質(zhì)純化后的單抗料液
平衡緩沖液：50mM醋酸鈉，pH5.12
洗脫緩沖液：50mM醋酸鈉，1M氯化鈉，pH5.11，0~100%B 20CV
保留時(shí)間：5 min
圖5. MaXtar® S HC的結(jié)合洗脫圖譜
表4. MaXtar® S HC的純化結(jié)果
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