純化小技巧 | 抗體分離中的陽離子交換層析介質(zhì)

發(fā)布時(shí)間：2024-5-23

在抗體純化的經(jīng)典三步法

親和捕獲+陽離子交換+陰離子交換中

早期已介紹過百林科陰離子交換層析介質(zhì)

詳見

【純化小技巧 | 抗體分離中的陰離子交換層析介質(zhì)】

　　今天，重點(diǎn)介紹一下百林科陽離子交換層析介質(zhì)。

　　百林科陽離子交換層析介質(zhì)豐富多樣，依據(jù)基架類型，分為MaXtar® 基架和Chromstar® 基架，兩者主要區(qū)別在于耐壓，MaXtar® 基架通?？梢阅褪?.5MPa壓力，Chromstar®基架可以耐受0.3MPa壓力；根據(jù)配基的類型，可以分為SP(強(qiáng)陽)、S(強(qiáng)陽)、CM(弱陽)幾種類型。

百林科MaXtar® 基架的

幾種陽離子交換層析介質(zhì)介紹

　　* 動態(tài)載量的測量條件：4.7 ml 預(yù)裝柱，裝柱高度：10 cm，在保留時(shí)間為5分鐘時(shí)測量10% 穿透時(shí)的動態(tài)結(jié)合能力。測試緩沖液：50 mM 醋酸鈉，pH 5.5(單克隆抗體)。

　　** 動態(tài)載量測量條件：裝柱高度：10 cm，測試流速600 cm/h ，測試緩沖液：0.1 M 檸檬酸鹽溶液，pH 3.0，測試樣品：4 mg/ml 的 β- 乳球蛋白樣品，當(dāng) β-乳球蛋白的穿透量達(dá)到10% 時(shí)，單位介質(zhì)體積(ml) 的 β- 乳球蛋白上樣量(mg)。

　　*** 動態(tài)載量測量條件：裝柱高度：10 cm，測試流速150 cm/h ，測試緩沖液：0.2 M 磷酸鈉溶液，pH 7.2，測試樣品：4 mg/ml 溶菌酶樣品，當(dāng)溶菌酶的穿透量達(dá)到10% 時(shí)，單位介質(zhì)體積(ml) 的溶菌酶上樣量(mg)。

　　MaXtar® S HC作為百林科的明星產(chǎn)品，是一款高載量高分辨率的強(qiáng)陽離子交換層析介質(zhì)，利用不同分子在特定條件下電荷性質(zhì)和多少的差異對其進(jìn)行分離。

在抗體的應(yīng)用上有突出的高載量

　　采用CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體(精純后蛋白)作為樣品，對MaXtar® S HC和MaXtar® SP HR的DBC(動態(tài)結(jié)合載量)進(jìn)行探索，發(fā)現(xiàn)：MaXtar® S HC的DBC明顯優(yōu)于MaXtar® SP HR，是其的2倍。實(shí)驗(yàn)條件如下：

　　層析柱：4.7 ml預(yù)裝柱，裝柱高度10 cm，柱體積約4.7 ml

　　樣品：CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體(精純后蛋白)

　　平衡緩沖液：50mM醋酸鈉，pH5.5

　　洗脫緩沖液：50mM醋酸鈉，1M氯化鈉，pH5.5

　　保留時(shí)間：5 min