純化小妙招| 抗體分離中的陰離子交換層析介質(zhì)

發(fā)布時(shí)間：2023-10-19

　　提到抗體純化工藝，就不得不提被廣泛使用的經(jīng)典三步法：親和捕獲+陽(yáng)離子交換+陰離子交換。今天，重點(diǎn)跟大家聊一聊其中的第三步--陰離子交換層析介質(zhì)。

　　陰離子交換層析介質(zhì)，主要在整個(gè)工藝過(guò)程中起到去除聚體、蛋白A配基脫落、病毒、內(nèi)毒素、HCD以及HCP等。

　　通常情況下，陰離子交換層析會(huì)采用流穿的形式，即抗體在上樣過(guò)程中穿透，雜質(zhì)吸附在層析介質(zhì)上。根據(jù)抗體分子等電點(diǎn)的不同，選擇合適的緩沖液pH條件，控制抗體流穿，DNA、內(nèi)毒素及病毒等吸附在層析介質(zhì)上。

　　百林科陰離子交換層析介質(zhì)家族中的MaXtar Q 是一款強(qiáng)陰離子交換層析介質(zhì)，利用不同分子在特定條件下電荷性質(zhì)和多少的差異對(duì)其進(jìn)行分離。

　　該層析介質(zhì)能很好的用于多種生物分子的分離純化，比如：重組蛋白、抗體、核酸、病毒及類病毒顆粒、多糖等。

　　相比于傳統(tǒng)的強(qiáng)陰離子交換層析介質(zhì)，MaXtar Q表現(xiàn)出更優(yōu)的性能：

　　01　　改良的 MaXtar 基架具有更強(qiáng)剛性，因此在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率。

　　02　　通過(guò)升級(jí)配基偶聯(lián)方式，提高層析介質(zhì)的動(dòng)態(tài)結(jié)合載量。

　　參數(shù)介紹

　　* 動(dòng)態(tài)載量的測(cè)量條件：裝柱高度：10cm，測(cè)試流速600cm/h，測(cè)試緩沖液：0.05M Tris-HCl溶液，pH8.0，測(cè)試樣品：6mg/ml的BSA樣品，當(dāng)BSA的穿透量達(dá)到10%時(shí)，單位介質(zhì)體積(ml)的BSA上樣量 (mg)。
　　** 層析介質(zhì)在40℃，pH2-14環(huán)境下放置7天后，其理化性質(zhì)和功能沒有明顯變化。
　　*** v/v，體積比。

應(yīng)用案例-- MaXtar Q進(jìn)行抗體精純

　　層析柱：Chrom-LinX 10/400P，柱高20cm

　　樣品：抗體親和洗脫液，調(diào)節(jié)pH為6.96

　　載量：200 mg/mL

　　平衡緩沖液：30 mM PB，pH 7.0

　　再生緩沖液：30mM PB，1M NaCl，pH 7.0

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圖1 MaXtar Q層析圖譜

表1 MaXtar Q層析結(jié)果

　　小結(jié)：MaXtar Q在抗體純化中有較好的工藝表現(xiàn)。

　　基于法規(guī)中“對(duì)純化用材料(如層析柱填料)的重復(fù)使用的可接受程度進(jìn)行驗(yàn)證”的要求，以及越來(lái)越多的使用人員提出CIP對(duì)層析介質(zhì)的重復(fù)使用影響的需求，選擇常用的陰離子交換介質(zhì)MaXtar Q進(jìn)行了150個(gè)循環(huán)的模擬驗(yàn)證，驗(yàn)證條件采用酸+鹽、堿交替的形式，綜合考察CIP對(duì)其性能(動(dòng)態(tài)結(jié)合載量及功能)的影響。

　　實(shí)驗(yàn)條件如下：

　　層析柱：Chrom-Screen MaXtar Q 4.7ml；10 cm

　　樣品：BSA(動(dòng)態(tài)結(jié)合載量)；β-乳球蛋白B和A(功能)

　　平衡緩沖液：20 mM PB，0.07M NaCl，pH6.2

　　CIP1：1M HAc，1M NaCl，pH3.0

　　CIP2：1 M NaOH，pH14

　　沖洗：純化水

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