試劑中英文名稱：pETBlue-2 Vector 大腸桿菌表達(dá)載體

儲(chǔ)存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。

產(chǎn)地：陜西西安

載體用途： 大腸桿菌表達(dá)載體

載體大?。?3653bp

載體標(biāo)簽： C-HSV，C-6×His

原核抗性： Amp

克隆菌株： DH5α

真核抗性：LacZ

啟動(dòng)子： T7

復(fù)制子： pBR322

純度：95%

一、背景描述：（pETBlue-2 Vector 大腸桿菌表達(dá)載體）

The pETBlue vectors are designed to identify recombinants by traditional blue/white screen-ing while also allowing T7lac promoter based expression of target genes.

Screening is independent of expression because the T7lac expression promoter is in an opposed orientation relative to the E.coli promoter that mediates blue/white screening.

pETBlue-2 defines the open reading frame and in-serts must be cloned in-frame if expression is desired.

The vector features an expanded multiplecloning site (MCS) and optional C-terminal HSV•Tag and His•Tag sequences.

The cloning/expres-sion region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below.

The sequence is numbered from the first base of the T7 promoter sequence.

Unique sites are shown on the circlemap.

The f1origin in pETBlue-2 is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single stranded DNA that corresponds to the coding strand.

Therefore, single stranded sequencing should be performed using the pETBlueDOWN prime.

技術(shù)原理

（1）雙功能分離設(shè)計(jì)

目標(biāo)基因以反義方向插入lacZα肽編碼區(qū)，實(shí)現(xiàn)藍(lán)白篩選；而T7轉(zhuǎn)錄/翻譯信號(hào)位于基因上游，確保表達(dá)時(shí)以正義方向工作。

（2）嚴(yán)格調(diào)控表達(dá)

T7啟動(dòng)子不被大腸桿菌RNA聚合酶識(shí)別，僅由T7 RNA聚合酶（由DE3溶源噬菌體提供）特異性激活，實(shí)現(xiàn)本底泄漏低、誘導(dǎo)后高表達(dá)。

（3）高翻譯效率

利用T7基因10的翻譯起始信號(hào)（RBS），提升目標(biāo)蛋白產(chǎn)量。

二、應(yīng)用前景

（1）基礎(chǔ)研究

重組蛋白表達(dá)：廣泛用于克隆、表達(dá)與純化外源蛋白，尤其適合需要可溶性表達(dá)的課題。

蛋白互作研究：融合標(biāo)簽支持Pull-down、Co-IP等互作實(shí)驗(yàn)。

（2）工業(yè)與疫苗開發(fā)

載體設(shè)計(jì)理念（如高效啟動(dòng)子、標(biāo)簽系統(tǒng)）已被用于疫苗抗原表達(dá)平臺(tái)，展示其在生物制劑生產(chǎn)的潛力。

（3）高通量篩選優(yōu)化

藍(lán)白篩系統(tǒng)適用于大規(guī)模重組庫(kù)篩選，為突變體文庫(kù)構(gòu)建提供便利。

使用優(yōu)勢(shì)

（一）高效克隆與篩選

藍(lán)白篩選手動(dòng)直觀，大幅減少假陽性；高拷貝數(shù)pUC復(fù)制起點(diǎn)（>500拷貝/細(xì)胞）提升質(zhì)粒產(chǎn)量。

（二）靈活的表達(dá)控制

IPTG誘導(dǎo)濃度可調(diào)，適用于毒性蛋白或優(yōu)化表達(dá)條件。

（三）便捷的蛋白純化與檢測(cè)

雙標(biāo)簽（6×His/HSV•Tag）支持多種純化策略（如鎳柱、抗體親和層析）和檢測(cè)方法。

（四）系統(tǒng)兼容性

與pET系統(tǒng)宿主（如BL21系列）高度匹配，Lon/OmpT蛋白酶缺陷型菌株減少蛋白降解。

（五）商業(yè)化穩(wěn)定性

質(zhì)粒以凍干粉形式提供，4℃避光保存，穩(wěn)定性好；配套詳細(xì)操作流程（溶解、轉(zhuǎn)化、保存）。

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