【??參數(shù)信息】
英文名稱(chēng):pGBKT7 Vector (pGBKT7 DNA-BD Vector) 酵母雙雜交載體
中文名稱(chēng):pGBKT7 Vector酵母雙雜交載體
載體大?。?303 bp(雙鏈DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu))。
啟動(dòng)子:包含ADH1啟動(dòng)子(用于驅(qū)動(dòng)表達(dá))、T7啟動(dòng)子(用于體外轉(zhuǎn)錄和翻譯)。
復(fù)制子:包含2μ ori(酵母復(fù)制子)和pUC ori(大腸桿菌復(fù)制子)。
抗性基因:Kan和TRP1。
克隆位點(diǎn):多克隆位點(diǎn)(MCS),支持限制性內(nèi)切酶切割和克隆。
表位標(biāo)簽:c-Myc表位標(biāo)簽,用于蛋白檢測(cè)。
用途:用于酵母雙雜交系統(tǒng),表達(dá)GAL4 DNA結(jié)合域(DNA-BD)與目標(biāo)蛋白的融合蛋白。
純度:≥95%
儲(chǔ)存條件:-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
pGBKT7 Vector酵母雙雜交載體,可用于表達(dá) GAL4 DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DNA-BD)與 bait 蛋白的融合蛋白。
其核心功能是通過(guò)酵母雙雜交系統(tǒng)檢測(cè)蛋白質(zhì)間的相互作用。
其結(jié)構(gòu)和特性包括:
啟動(dòng)子與表達(dá)系統(tǒng):
ADH1 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)融合蛋白的高表達(dá)。
T7 啟動(dòng)子促進(jìn)體外轉(zhuǎn)錄和翻譯。
融合蛋白構(gòu)建:
載體表達(dá) GAL4 DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域與 bait 蛋白的融合蛋白,通過(guò)多克隆位點(diǎn)(MCS)插入目標(biāo)基因。
篩選與標(biāo)記:
Kanr和 TRP1 營(yíng)養(yǎng)標(biāo)記 用于篩選宿主細(xì)胞。
其他元件:
c-Myc 表位標(biāo)簽 用于蛋白檢測(cè)。
2μ ori 和 pUC ori 用于復(fù)制和維持質(zhì)粒穩(wěn)定性。
【優(yōu)勢(shì)】
酵母雙雜交系統(tǒng)主要應(yīng)用于快速驗(yàn)證已知蛋白之間的相互作用或?qū)ふ倚碌南嗷プ饔玫鞍踪|(zhì),尤其在尋找蛋白質(zhì)互作區(qū)域時(shí)相當(dāng)有優(yōu)勢(shì)。
其優(yōu)點(diǎn)有:
(1)采用高拷貝和強(qiáng)啟動(dòng)子的表達(dá)載體使目的蛋白過(guò)量表達(dá),方便復(fù)合物形成;
(2)篩選過(guò)程在真核酵母活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行,一定程度上反映了體內(nèi)的真實(shí)情況;
(3)檢測(cè)的結(jié)果是基因表達(dá)產(chǎn)物的級(jí)聯(lián)效應(yīng),通過(guò)mRNA產(chǎn)生多種穩(wěn)定的酶使信號(hào)放大,因而可檢測(cè)存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用,而細(xì)胞內(nèi)的免疫共沉淀依賴(lài)于兩個(gè)互作蛋白質(zhì)的解離程度,因?yàn)樵诿庖叱恋淼倪^(guò)程中通過(guò)洗滌的過(guò)程降低了互作信號(hào);
【相關(guān)試劑】
iFluor 647 TCO
ATTO 488 acid ATTO 488酸
Lucifer Yellow CH (Lithium salt)
Tetranactin 四活菌素 33956-61-5
三活菌素 Trinactin 7561-71-9
Monactin 單活菌素 7182-54-9
BMPO (Spin trapping reagent)
Dewaxing/Clearing Reagent for Histology
Permount Mounting Medium Permount
N-glycolylneuraminic acid (Neu5Gc) N-羥乙酰神經(jīng)氨酸
N-Acetylneuraminic Acid (NANA, Neu5Ac) N-乙酰神經(jīng)氨酸
3'-Sialyllactose Sodium Salt (NANA-Lactose, 3'-SL) 3'-唾液乳糖鈉鹽
AFDye 488 NHS ester (Equivalent toAlexa Fluor 488 NHS ester)
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