【??參數(shù)信息】

英文名稱：OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell

中文名稱：OrigamiB(DE3) 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

規(guī)格：10×100μl，50×100μl

運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸。

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡單概述】

OrigamiB菌株與原始菌Origami一樣，包含突變的硫氧還蛋白還原酶和gor，表達(dá)主要還原途徑的兩個(gè)關(guān)鍵酶，有利于形成正確折疊的含二硫鍵的蛋白，增強(qiáng)蛋白的可溶性。

該菌株包含BL21的lon和ompT缺失，能提高蛋白穩(wěn)定性。

DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體。

這種菌株適用于目的基因克隆在pET載體上的蛋白生產(chǎn)，由IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。

具有KanR和四環(huán)素抗性，因此不適合與僅能用KanR或四環(huán)素篩選的質(zhì)粒聯(lián)用。

基因型：F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522:: Tn10 trxB (KanR, TetR)

OrigamiB(DE3) 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。

經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108 cfu/μg DNA。

且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

【實(shí)驗(yàn)步驟】

（所有操作需在無菌條件下進(jìn)行）：

（1）融化細(xì)胞：從-80℃取出感受態(tài)細(xì)胞（建議用量50-100μL），置于冰浴中融化約5分鐘。

（2）加入DNA：加入目的DNA，輕彈管底混勻，冰浴靜置25分鐘。

（3）熱激：42℃水浴熱激45秒。

（4）冰?。貉杆俎D(zhuǎn)移回冰浴，靜置2分鐘（避免搖動）。

（5）復(fù)蘇：加入700μL SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后37℃搖床復(fù)蘇45分鐘。

（6）涂布培養(yǎng)：涂布于含相應(yīng)抗生素的LB固體平板上，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)。

注意事項(xiàng)：

細(xì)胞保存于-80℃，避免反復(fù)凍融。

菌株具有KanR和四環(huán)素抗性，不能用于具此抗性質(zhì)粒的表達(dá)。

誘導(dǎo)蛋白表達(dá)時(shí)，IPTG濃度可選0.1~2mM，需優(yōu)化時(shí)間、溫度和濃度。

操作時(shí)穿實(shí)驗(yàn)服并戴手套，確保無菌。

【相關(guān)試劑】

MPP+ iodide

Tide Quencher 1胺

Tide Quencher 3胺

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請知悉。