【??參數(shù)信息】

英文名稱：HT115(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

中文名稱：HT115(DE3)大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

規(guī)格：10×100μl ，50×100μl

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡單概述】

菌株描述

HT115(DE3)菌株是一種RNAi飼養(yǎng)菌株，具四環(huán)素抗性，能在37℃，LB培養(yǎng)基上進(jìn)行有氧生長。主要用于線蟲的干擾實(shí)驗(yàn)。

HT115(DE3)菌株是一種特殊的RNase III缺陷型大腸桿菌菌株，此菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體。

除了用于線蟲RNAi干擾實(shí)驗(yàn)，也適用于靶基因克隆進(jìn)入T7啟動(dòng)子表達(dá)載體比如pET系列的蛋白表達(dá)。

HT115(DE3)大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是大腸桿菌HT115(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。

經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

【蛋白誘導(dǎo)步驟（僅作參考）】

1）從新鮮涂布平板上挑取一單克隆，轉(zhuǎn)移到含相應(yīng)抗生素的5ml LB液體培養(yǎng)基內(nèi)。

2）37℃，200rpm搖菌培養(yǎng)過液。

3）將步驟2）中過夜培養(yǎng)的菌液吸取0.5ml接種到含相應(yīng)抗生素的50ml LB液體培養(yǎng)基內(nèi)（建議使用500ml三角瓶培養(yǎng)）。

4）37℃，150rpm搖菌培養(yǎng)直至OD600達(dá)到0.6~0.8（建議0.6，約2.5h）。

5）【可選】用移液槍吸取1ml培養(yǎng)物到干凈的離心管內(nèi)，置于冰上直至用于凝膠分析或保存在-20℃。這是非誘導(dǎo)的對(duì)照樣本。

5）加入IPTG使其終濃度為1mM。目的蛋白的誘導(dǎo)時(shí)間可能在2~16h，依蛋白而異。

6）37℃，120rpm培養(yǎng)2~4h。為了確定目的蛋白的誘導(dǎo)時(shí)間，建議作一個(gè)時(shí)間周期優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，范圍從2~16h。

7）將培養(yǎng)物冰浴10min。4℃，5,000 x g離心10min收集菌株。

8）吸掉上清，將沉淀保存在-20℃（也能保存在較低的溫度）。

【相關(guān)試劑】

FITC-Con A FITC

Auramine O金胺O

BL21 (DE3)Competent Cell

Rosetta (DE3)Competent Cell

BL21 (DE3)pLysS Competent Cell

Picro Sirius Red Stain 天狼星紅染色液

Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell

OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell

Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請知悉。