【??參數(shù)信息】

英文名稱：DyLight 649 labeled Lycopersicon Esculentum

中文名稱：DyLight 649標(biāo)記的番茄凝集素

應(yīng)用：糖生物學(xué)，免疫熒光

熒光顏色：紅色

糖特異性：[GlcNAc]1-3, N-Acetylglucosamine

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡單概述】

DyLight 649標(biāo)記的番茄凝集素是一種穩(wěn)定的單亞基糖蛋白，由番茄提取的凝集素（LEL/TL）與遠(yuǎn)紅光熒光染料 DyLight 649 共價偶聯(lián)而成。

其糖類組分含約 85%半乳糖，在溶液中可能形成多聚體。

熒光特性：激發(fā)波長 655 nm，發(fā)射波長 670 nm，屬于遠(yuǎn)紅光范圍，適用于雙標(biāo)實驗。

特異性結(jié)合靶點

糖結(jié)合特異性：主要識別 [GlcNAc] 1,3-N-乙酰葡萄糖胺。

可結(jié)合 血型糖蛋白和糖蛋白，但對血型無特異性。

【實驗步驟（綜合操作流程）】

（一）試劑準(zhǔn)備

濃度：推薦工作濃度為 5–20 µg/mL（需用適當(dāng)緩沖液稀釋）。

沉淀處理：若長期儲存（2–8°C）后出現(xiàn)沉淀，需在 37°C 加熱溶解后再使用。

儲存條件：避光保存于 2–8°C，穩(wěn)定期約6個月。

（二）血管灌注法（活體標(biāo)記）

步驟：

麻醉動物，暴露頸動脈。

單次注射 200 µL DyLight 649-LEL 溶液（濃度按需調(diào)整）。

讓凝集素在血管內(nèi)循環(huán) 15分鐘。

用生理鹽水沖洗血管，清除未結(jié)合凝集素。

取出目標(biāo)組織（如腦、腫瘤），固定于 2–4% 多聚甲醛（PFA）。

（三）組織切片染色（離體標(biāo)記）

步驟：

制備新鮮或固定組織切片（厚度依需求）。

將稀釋后的DyLight 649-LEL（5–20 µg/mL）滴加于切片，覆蓋組織。

孵育條件：

短時孵育：室溫避光孵育30分鐘至1小時。

深度標(biāo)記（厚樣本） ：避光孵育 5天，中途翻轉(zhuǎn)樣本確保滲透均勻。

洗滌：用 0.2% PBST（含Tween-20的PBS） 洗滌3次，每次1小時，去除未結(jié)合凝集素。

固定增強(qiáng)：對厚組織建議用 4% PFA后固定24小時，提高標(biāo)記穩(wěn)定性。

（四）多色標(biāo)記（共染色）

順序操作：

先完成LEL染色并洗滌。

進(jìn)行其他標(biāo)記物染色（如SSEA-1、DDX4抗體）：

冰上避光孵育一抗（1:100稀釋）1小時。

洗滌后加熒光二抗（如Alexa Fluor 568，1:200稀釋）孵育30分鐘。

最終封片觀察（建議用抗淬滅封片劑）。

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。