【??參數(shù)信息】

英文名稱：Texas Red labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin (LEL, TL)

中文名稱：德克薩斯紅標(biāo)記的番茄凝集素

規(guī)格：1mg

熒光顏色：紅色

應(yīng)用：糖生物學(xué)、免疫熒光

糖特異性：[GIcNAc]1-3，N-乙酰葡萄糖胺

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

本產(chǎn)品德克薩斯紅標(biāo)記的番茄凝集素具有適當(dāng)數(shù)量的熒光染料，結(jié)合為該凝集素提供染色特性。

該綴合物基本上不含為綴合的熒光染料。激發(fā)在595nm，發(fā)射在615nm。

基本性質(zhì)：

LEL是一種穩(wěn)定的單亞基糖蛋白，由約50%的阿拉伯糖和半乳糖組成，在溶液中可能形成多聚體。

其糖結(jié)合特異性主要針對(duì)[GlcNAc]β1-3-N-乙酰葡糖胺，并能與血型糖蛋白和Tamm-Horsfall糖蛋白結(jié)合。

盡管與馬鈴薯凝集素、曼陀羅凝集素和麥胚凝集素有部分相似性，但其結(jié)合特性存在差異。

標(biāo)記特性：

Texas Red是一種熒光染料，標(biāo)記后形成LEL-熒光團(tuán)偶聯(lián)物，呈亮紅色，激發(fā)波長(zhǎng)約595 nm，發(fā)射波長(zhǎng)約615 nm（與Texas Red濾光片兼容）。

偶聯(lián)物經(jīng)過優(yōu)化，染料結(jié)合比例適當(dāng)，確保染色效果，且?guī)缀醪缓坞x熒光染料。

【使用方法】

（一）使用前準(zhǔn)備

試劑處理

溶解沉淀：若長(zhǎng)期儲(chǔ)存后出現(xiàn)沉淀，需在37°C下加熱溶解（避免高溫破壞活性）。

離心去雜質(zhì)：使用前以15,000 rpm、4°C離心30分鐘，去除顆粒物（尤其適用于細(xì)胞染色）。

稀釋溶劑：推薦用PBS（磷酸鹽緩沖液）稀釋，部分產(chǎn)品建議含0.2 mg/ml肝素（防止非特異性結(jié)合）。

濃度與稀釋

工作濃度：推薦5–20 µg/ml（根據(jù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化調(diào)整）。

儲(chǔ)存液濃度：商品化產(chǎn)品通常為1–2 mg/ml。

（二）實(shí)驗(yàn)步驟

（1）組織切片染色（直接法）

樣本準(zhǔn)備：

石蠟/冰凍切片脫蠟、水化，或新鮮組織切片固定（如4%多聚甲醛）。

染色操作：

將稀釋后的LEL-Texas Red（5–20 µg/ml）滴加于切片，覆蓋樣本。

避光孵育：室溫或4°C孵育5–45分鐘（時(shí)間依樣本類型調(diào)整）。

洗滌：

用冷PBS洗滌3次，每次5分鐘（去除未結(jié)合凝集素）。

封片與觀察：

封片劑（如VECTASHIELD®）封固，避光保存。

熒光顯微鏡檢測(cè)：激發(fā)波長(zhǎng) 595–604 nm，發(fā)射波長(zhǎng) 606–615 nm（紅色熒光）。

（2）血管灌注標(biāo)記（活體/離體）

灌注液配制：

將LEL-Texas Red稀釋至5–20 µg/ml，溶于生理緩沖液（如PBS或人工腦脊液）。

灌注操作：

活體灌注：通過尾靜脈或心內(nèi)注射注入嚙齒類動(dòng)物，循環(huán)10–30分鐘。

離體灌注：離體器官灌注系統(tǒng)注入，確保均勻分布。

樣本處理：

灌注后取組織，制備切片或整體透明化（如ECi/EGi法）。

直接熒光觀察或進(jìn)一步免疫染色。

（3）細(xì)胞染色（如原始生殖細(xì)胞PGCs）

細(xì)胞預(yù)處理：

血液/組織樣本用PBS洗滌，含肝素（0.2 mg/ml）防凝。

組織需yi酶分散（≤10分鐘，保留糖鏈結(jié)構(gòu)）。

染色步驟：

細(xì)胞重懸于1/250稀釋的LEL-Texas Red（約8 µg/ml）中。

避光冰浴孵育5分鐘。

洗滌與分選：

加10倍體積冷PBS，1500 rpm離心5分鐘，重復(fù)兩次。

流式細(xì)胞儀分選（Ex/Em: 595/615 nm）或顯微觀察。

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。