【參數(shù)信息】

英文名稱：SYBR Green I Nucleic Acid Stain(PCR Grade, 10,000×)

中文名稱：SYBR Green I核酸染料（PCR級，10,000×）

形態(tài)：液態(tài)

激發(fā)波長（Ex）：497 nm

發(fā)射波長（Em）：520–525 nm（與dsDNA結(jié)合后）

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】

SYBR Green I Nucleic Acid Stain是一種高靈敏度的不對稱花青素類熒光核酸染料，可用于雙鏈DNA檢測。

其PCR級別指該試劑經(jīng)過純化處理，滿足熒光定量PCR對低抑制性、高信噪比的要求。

【作用機制】

(一) 分子結(jié)合機制

選擇性嵌入dsDNA小溝

SYBR Green I通過靜電作用和疏水作用嵌入dsDNA雙螺旋小溝，形成穩(wěn)定復(fù)合物。

結(jié)合特異性：

對dsDNA親和力較高；

與dsRNA結(jié)合較弱，與ssDNA/RNA幾乎不結(jié)合。

構(gòu)象變化驅(qū)動熒光增強

游離狀態(tài)：染料分子呈扭曲構(gòu)象，熒光微弱；

結(jié)合dsDNA后：分子構(gòu)象舒展，電子躍遷效率提升，導(dǎo)致熒光爆發(fā)性增強。

【使用方法】

凝膠電泳染色方法

（一）點染法（靈敏度較高）

步驟：

① 稀釋10,000×原液至100×工作液

② DNA樣品與100×工作液按 10:1 混合，室溫避光10min

③ 加Loading Buffer上樣

優(yōu)點：染料用量少，小片段分辨率高

缺點：大片段可能滯后

（二）膠染法

步驟：

① 融膠后冷卻至50℃，按 2500:1 比例加染料

② 灌膠凝固后上樣電泳

注意：膠厚≤5mm，避免長時間加熱導(dǎo)致染料分解

（三）泡染法（操作簡便）

步驟：

① 電泳后凝膠浸入染色液

② 搖床染色20–60min

③ 超純水洗滌降低背景

染色液可重復(fù)使用≤4次

【相關(guān)試劑】

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。