qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox) 產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox ) | HRF0031 | 1 mL |
HRF0032 | 5×1 mL | |
HRF0033 | 50×1 mL |
產(chǎn)品描述
qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)是 2×實時定量 PCR 擴增的預混合溶液。Mix中含有熱啟動 DNA Polymerase 、SYBR Green I 、dNTPs、Mg2+ 。使用時‘’僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行實時熒光定量 PCR ，大大簡化操作過程，降低污染幾率。
本品采用的 DNA 聚合酶配體可以隨溫度變化實時調(diào)節(jié) DNA 聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特異性 PCR 擴增的因 子和提升 PCR 反應擴增效率的因子，使定量 PCR 可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
適用機型
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期18個月。
本品避免反復凍融。 產(chǎn)品中含有熒光染料 SYBR Green I，保存或配制反應體系時需避免強光照射。
注意事項
1）推薦使用本公司 cDNA 合成試劑盒，以有效去除 RNA樣品中殘留的基因組。
2）解凍后 Master Mix 可能出現(xiàn)絮狀物質(zhì)，4℃放置并上下顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
4）本產(chǎn)品僅作科研用途！
反應體系（推薦冰上配制）
組分 | 體積（μL） | 體積（μL） | 終濃度 |
qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox ) | 25 | 10 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
模板 DNA | X | X | - |
無菌超純水 | To 50 | To 20 | - |
【注】： 使用前務必充分混勻， 避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
a) 引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在 0.1- 1.0 μM 之間進行調(diào)整。
b) 模板濃度：如模板類型為未稀釋 cDNA 原液，使用體積不應超過 qPCR 反應總體積的 1/10。
c) 模板稀釋：cDNA 原液建議 5- 10 倍稀釋，最佳模板加入量以擴增得到的 CT 值在 20-30 個循環(huán)為好。
d) 反應體系：推薦使用20 μL 或 50 μL ，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
e) 體系配制：請于超凈工作臺內(nèi)配制， 并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管； 推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染 和氣溶膠污染。
擴增程序 （兩步法）
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
變性 | 95℃ | 10 sec | 40 |
退火/延伸 | 60℃ | 30 sec★ | |
熔解曲線階段 | 儀器默認設(shè)置 1 | ||
擴增程序 （三步法）
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
變性 | 95℃ | 10 sec | 40 |
退火 | 55-60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 20 sec★ | |
熔解曲線階段 | 儀器默認設(shè)置 | ||
【注】高特異性可選擇兩步法，高效率擴增可選擇三步法。
qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox) 天津天正信達供應：RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒 、提取試劑盒、色譜進樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實驗耗材，移液器等我司擁有一支覆蓋生物化學、分子生物學、免疫學等專業(yè)人員的研發(fā)、構(gòu)建了儀器設(shè)備齊全的實驗技術(shù)平臺，主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機、全波長酶標儀、高速落地離心機和qPCR儀等大型儀器設(shè)備。
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