r-氨基丁酸（GABA）小分子蛋白檢測試劑盒，科潤達生物進口，德國IBL品牌

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：r-氨基丁酸檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：GABA ELISA

【產(chǎn)品規(guī)格】

96T

【預(yù)期用途】

此r-氨基丁酸（GABA）小分子蛋白檢測試劑盒RE54201可用于人血清，血漿和尿液中r-氨基丁酸的體外定量檢測。

【檢測原理】

提取和衍生后，GABA的定量檢測采用ELISA方法進行。

競爭性ELISA使用微量滴定板?？乖c微孔板的固相結(jié)合。標準品，質(zhì)控品和樣品以及固相結(jié)合分析物的酰化分析物濃度競爭固定數(shù)量的抗血清結(jié)合位點。當(dāng)系統(tǒng)處于平衡狀態(tài)時，通過洗滌除去游離抗原和游離抗原-抗體復(fù)合物。使用TMB作為底物，通過抗兔IgG-過氧化物酶聯(lián)物檢測與固相結(jié)合的抗體。在450nm監(jiān)測反應(yīng)。

使用把標準品濃度和OD值做標準曲線，未知樣本的濃度通過他們的OD值在標準曲線上讀取。

檢測程序（75-7500ng/mL）

1. 提?。?/span>

1) 加入100ul標準品，質(zhì)控品和樣本到提取板的相應(yīng)板孔中。

2) 每孔加入100ul稀釋劑，封板，室溫下（20 – 25 °C）震蕩器（600rpm）孵育15min。

3) 棄去溶液，并在吸水紙上拍干。 用500μl水（去離子水，蒸餾水或超純水）洗滌每個孔，并在振蕩器（約600rpm）下在室溫（20-25℃）下孵育5分鐘。

4) 棄去溶液，并在吸水紙上拍干。

5) 在提取板相應(yīng)的空中加入400ul洗脫緩沖液，封板，室溫下（20 – 25 °C）振蕩器（600rpm）孵育10min。

6) 使用100μl進行后續(xù)衍生化。

2. 衍生化：

7) 在酶標板中加入100ul提取的標準品，質(zhì)控品和樣本。

8) 每孔加入10ul NaOH。

9) 每孔加入新鮮配制的平衡試劑50ul并在振蕩器（約600rpm）下孵育1min。

10) 每孔加入10ulD-試劑。

11) 封板，室溫下（20 – 25 °C）振蕩器（600rpm）孵育2小時。

12) 每孔加入200ulQ-緩沖液。

13) 振蕩器（600rpm）孵育10min。

14) 使用50ul進行后續(xù)的ELISA實驗。

3. GABA ELISA：

15) 在GABA酶標板中，每孔加入50ul衍生化的標準品，質(zhì)控品和樣本。

16) 每孔加入50ul抗血清，并輕輕混勻。

17) 封板，2-8 °C孵育15-20小時（過夜）?；蛘咴?/span>振蕩器（約600rpm）下在室溫（20-25℃）下孵育2小時。

18) 移去封板膜，將孔中溶液棄去。每孔加入300ul洗滌液洗滌3次，每次洗板都要在吸水紙上拍干。

19) 每孔加入100ul的酶聯(lián)物。

20) 室溫下（20 – 25 °C）振蕩器下（600rpm）孵育30min。

21) 將孔中溶液棄去。每孔加入300ul洗滌液洗滌3次，每次洗板都要在吸水紙上拍干。

22) 每孔加入100ul底物液，室溫下（20 – 25 °C）振蕩器（600rpm）孵育20-30min，避免陽光直射。

23) 每孔加入100ul終止液，并混勻。

24) 10min內(nèi)，在450nm處讀取OD值（參考波長620和650nm）。

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