動物組織直接PCR試劑盒

產品描述

動物組織直接 PCR 試劑盒是一款可直接對不同動物組織進行 PCR 擴增的試劑盒，適應性廣、穩(wěn)定性強、操作簡易。

本試劑盒采用的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種動物組織樣品并釋放出基因組 DNA，如昆蟲足翅、鼠尾、 鼠趾、動物皮膚和內臟等。裂解產物可以用于 DNA 提取純化、也可以直接用于 PCR 反應、也可以在 -20℃ 或以下溫度條件下長期保存?zhèn)溆谩?/span>

本試劑盒中提供的 2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很強的擴增兼容性，不需要額外采用純化提取試劑去除裂解產物中的各種殘骸雜質，能直接以待測樣品裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑為 2 倍濃縮 PCR 反應混合液，包含了用于 PCR 擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化擴增步驟的操作過程，降低污染機率。

該試劑盒可用于動物基因擴增檢測、轉基因動物基因型鑒定等。

產品組分

a）Lysis Buffer 和 Proteases 兩種組分配合使用于動物組織裂解。

b）2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含 PCR 擴增所需要的熱啟動 Taq DNA 聚合酶、dNTP 和 Mg2+等；已混有溴酚藍染料作為電泳指示劑， PCR 產物可以直接進行電泳。

c）5 × PCR Enhancer ：高GC含量擴增（如大于65%）時，建議使用5 × PCR Enhancer。

動物組織直接PCR試劑盒

運輸方法

冰袋運輸，有效期1年。

保存方式

1. 試劑 10184-A【Lysis Buffer】為動物組織裂解緩沖液，建議保存于2-8℃。 

2. 試劑 10184-B【Proteases】為動物組織裂解劑，使用時請勿長久開蓋，建議保存于-20℃，避免反復凍融。

3. 試劑 10184-C【2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】，建議保存于-20℃，避免反復凍融。

4. 試劑 10184-D【5 × PCR Enhancer】，建議保存于-20℃，避免反復凍融。

操作方法

1. 在離心管中加入 200 μL Lysis Buffer和2 μL Proteases，輕輕渦旋混勻。

2. 取約 10 mg（長度2 mm左右）動物組織，置于上述離心管中，輕輕渦旋混勻。

3. 55℃孵育5-30 min，然后 95℃處理5 min。 

4. 12000 rpm 離心2 min。

5. 將上清轉移至新的離心管，-20℃保存或直接用于 PCR 擴增。

【注】：

a）Lysis Buffer 與 Proteases 混合后盡快使用，不宜長期保存；大量樣本操作時，可以將 Lysis Buffer 與 Proteases 按 100 μL:1 μL 的比例混勻備用。 

b）組織應取少量并盡量剪碎，以便裂解反應更順利進行。各組織推薦使用量：鼠尾：長度2-4 mm；鼠趾：1-4個；鼠臟器、腦：直徑2-4 mm；斑馬魚、線蟲、果蠅等昆蟲組織：1-4個；細胞數(shù)量:10⁵-10⁸個。斑馬魚、線蟲、果蠅等較小樣本的組織，可適當減少Lysis Buffer至50-100 μL。昆蟲等外殼堅硬的樣本，建議剪碎樣本并增加Proteases至4 μL。

c）55℃孵育，一般 5 min 即可滿足多數(shù) PCR 需求，如鼠尾、鼠耳等組織；若需要的 DNA 量較大或樣品較難裂解，可將時間延長至 30 min 或更久；裂解時間可在5-30 min之間調整，組織塊不需裂解，殘余的部分在后續(xù)離心步驟中可被除去。 

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