小鼠組織直接PCR試劑盒
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) | HRF0221 | 50 T | 423.00 |
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) | HRF0222 | 200 T | 1083.00 |
產品描述
本試劑盒可直接快速地對小鼠組織（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等）樣本進行PCR擴增，具有的樣本兼容性。本試劑盒配備了強力的裂解緩沖液，可以快速裂解樣品，釋放基因組DNA。裂解液可以直接加入到PCR反應體系中，無需精提純化，操作方便。此外，本試劑盒對樣品投入量要求低，5 mg小鼠組織或1-5 mm鼠尾即可進行實驗。
本試劑盒提供的2× Mouse Direct PCR Mix為2倍濃度的熱啟動PCR反應液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。
該試劑盒可用于轉基因鑒定、小鼠基因分型等。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規(guī)格 | |
HRF0221（50 T） | HRF0222（200 T） | ||
10185-A | Buffer ML | 1 mL×5 | 20 mL×1 |
10185-B | Buffer MT | 0.6 mL | 1.25 mL×2 |
10185-C | 2× Mouse Direct PCR Mix | 500 μL | 1 mL×2 |
a)Buffer ML 為裂解緩沖液，包含了強力蛋白變性劑，請戴手套操作。
b)Buffer MT 為終止緩沖液，用以終止Buffer ML的裂解功能。
c)2× Mouse Direct PCR Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優(yōu)化劑、穩(wěn)定劑和電泳指示染料等。
運輸方法
冰袋運輸。
保存方法
組分A：2-8℃保存，有效期1年。使長時間多次使用，請分裝凍存，避免交叉污染。
組分B/C：-20℃保存，避免反復凍融。有效期1年。
小鼠組織直接PCR試劑盒 操作方法
樣品基因組DNA釋放
1. 剪取5-10 mg動物組織或1-5 mm鼠尾，置于1.5 mL離心管中；
2. 在上述離心管中加入90 μL Buffer ML，輕輕渦旋使得樣品被裂解液浸潤，短暫離心；
3. 在恒溫孵育儀中設置95℃孵育15 min；
4. 加入10 μL Buffer MT，輕彈混勻，終止裂解;
5. 選做步驟：12000 rpm離心2 min；
6. 將上清轉移至新的離心管，4℃或-20℃保存或直接取上清用于后續(xù)PCR擴增。
【注】：組織應盡量剪碎，以便裂解反應更順利進行。
【注】：95℃孵育，一般15 min即可滿足多數PCR需求。若需要的DNA量較大或樣品較難裂解，可將時間延長至30 min。組織塊不需裂解，殘余的部分在后續(xù)離心步驟中可被除去。
PCR反應鑒定——PCR反應體系
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Mouse Direct PCR Mix | 10 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 0.2-0.4 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 0.2-0.4 μM |
裂解產物（DNA模板） | 1 | - |
ddH2O | 補足至 20 μL | - |
【注】：各組分使用前應充分混勻。
a）模板使用量：建議按1-10%總體系量取用模板，20 μL體系建議采用1 μL上清液作為模板；
b）引物終濃度：0.2-0.4 μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內調整引物濃度；
c）反應體系：推薦使用20 μL，也可根據使用習慣調整體系體積大??；
d）體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。
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