荷瑞生物(heruibio)是福建荷瑞生物科技有限公司的注冊商標(biāo),公司專注于工具酶原料及抗原抗體的研發(fā)和生產(chǎn)。是集研發(fā)、生產(chǎn)和銷售為一體的生命科學(xué)企業(yè),為生命科學(xué)領(lǐng)域科研人員提供全面的產(chǎn)品和服務(wù)。公司產(chǎn)品線包含PCR、qPCR、RT-PCR、克隆、細(xì)胞培養(yǎng)與檢測、支原體預(yù)防與檢測、抗原抗體等基礎(chǔ)生物學(xué)相關(guān)的科研試劑,以及擁有齊全的生理生化指標(biāo)檢測試劑盒。公司研發(fā)實(shí)力:擁有一支覆蓋生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等專業(yè)人員的研發(fā)、生產(chǎn)隊(duì)伍,構(gòu)建了儀器設(shè)備齊全的實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái),主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機(jī)、全波長酶標(biāo)儀、高速落地離心機(jī)和qPCR儀等大型儀器設(shè)備我們不僅能夠提...
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熱啟動(dòng)探針法定量PCR Mix產(chǎn)品參數(shù)
| 產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 級(jí)別 | 其他 |
熱啟動(dòng)探針法定量PCR Mix詳細(xì)信息
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 |
HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG熱啟動(dòng)探針法定量PCR Mix(含抗體修飾熱啟動(dòng)酶+hUDG) | HRF0071 | 100T |
產(chǎn)品描述
HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG 是一款適用于DNA模板(如DNA病毒)的探針法qPCR DNA 聚合酶,以其的定量性被廣泛應(yīng)用,并能有效的防止污染,核心組分Taq HS DNA Polymerase是基于抗體法修飾,經(jīng)過升級(jí)改造提升模板親和能力的新一代熱啟動(dòng)DNA聚合酶。
產(chǎn)品組分
Mix 組分 | (100T) |
5×qPCR Buffer | 1000 μL |
Probe qPCR Mix hUDG | 120 μL |
a、內(nèi)含dUTP 及含鎂離子 buffer.
b、內(nèi)含 AB-HS Taq DNA polymerase
運(yùn)輸與保存方法
-20 ℃,保質(zhì)期1年。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1、qPCR反應(yīng);
2、高特異性和高靈敏度。
體系配制(以50μL反應(yīng)體系為例)
組分 | 體積 |
5×qPCR Buffer | 10 μL |
上游引物(20μM) | 0.5μL(variable) |
下游引物(20μM) | 0.5μL(variable) |
探針(20μM) | 0.25μL(variable) |
DNA 模板 | 30 μL(variable) |
Probe AB-HS qPCR Mix | 1.2 μL |
volume | to 50 μL |
注: 1、引物一般在 0.1μM-1μM 之間進(jìn)行調(diào)整,一般情況下引物濃度在 0.2μM可達(dá)到理想的檢測效果;
2、探針濃度一般在 50nM-250nM 質(zhì)檢進(jìn)行調(diào)整;
3、擴(kuò)增片段的長度一般在 80bp-150bp 之間。
反應(yīng)條件
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | 檢測熒光 |
25℃ | 5min | 1 | Off | |
預(yù)變性 | 95℃ | 3min | 1 | Off |
變性 | 95℃ | 15s | 45 | Off |
退火 | 60℃ | 30s | On |
注:1、預(yù)變性時(shí)間設(shè)置:由于本試劑用到的是抗體修飾酶,需要熱激活處理,一般建議預(yù)變性時(shí)間設(shè)為 95℃,3min。
退火溫度和時(shí)間設(shè)置:請根據(jù)引物的 Tm 值和目的基因的長度進(jìn)行調(diào)整。
熱啟動(dòng)探針法定量PCR Mix
結(jié)果分析
1.擴(kuò)增結(jié)束無擴(kuò)增曲線
1)建議加入高濃度和高質(zhì)量的 DNA 模板確保反轉(zhuǎn)的成功;
2)引物是否降解,可以通過PAGE 膠確定其完整性;
3)反應(yīng)循環(huán)數(shù)不夠,一般將循環(huán)數(shù)設(shè)為 40-45 個(gè)循環(huán);
4)確認(rèn)PCR 程序設(shè)置中是否設(shè)置了熒光采集過程。
2.CT 值出現(xiàn)過晚
1)反應(yīng)條件不夠優(yōu)化,可適當(dāng)降低退火溫度;
2)模板濃度過低或加樣量不足;
3)PCR 產(chǎn)物過長,一般PCR 產(chǎn)物推薦長度為 80-150bp。
3.陰性對照有明顯擴(kuò)增
1)Mix 液、ddH2O、引物和探針可能存在污染,更換新的重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
本產(chǎn)品僅供科研用途!
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