Thermo Scientific Pierce 直接 IP 試劑盒使用活化樹脂以共價(jià)方式將 IP 抗體（任何物種或類別）固定至瓊脂糖微珠，無需使用蛋白 A/G，從而在無抗體干擾的情況下實(shí)現(xiàn)免疫沉淀。

該方法的主要優(yōu)勢是有機(jī)會使用任何物種或亞類的純化抗體（而不僅僅是與蛋白 A 或 G 結(jié)合的類型）和能夠在不受抗體污染的情況下純化靶蛋白。使用該方法，還可從血清樣品中免疫沉淀抗原，而不會共純化非靶向免疫球蛋白。最后，該試劑盒使用微量離心杯從微珠狀瓊脂糖樹脂中有效清洗和分離樣品。

直接 IP 試劑盒的特點(diǎn)：

?僅需少于 10 µg 抗體 — 經(jīng)優(yōu)化的程序進(jìn)行單一 IP 實(shí)驗(yàn)時(shí)僅需 2 至 10 µg 抗體，不多于傳統(tǒng) IP 方法需要的抗體量
? 簡單高效的可擴(kuò)展性 — 僅使用單一免疫沉淀實(shí)驗(yàn)所需的抗體量或固定 100 至 200 µg 抗體即可制備即用型 IP 親和樹脂用于許多實(shí)驗(yàn)
? 極低抗體污染 — 將抗體不可逆地連接至瓊脂糖微珠，從而盡可能減少重鏈和輕鏈與純化蛋白共洗脫（即，低于 5%）
? 使用任何物種和亞類的抗體進(jìn)行 IP — 使用雞 IgY、人 IgE、小鼠 IgM 或任何其他純化蛋白
? 制備的抗體親和樹脂可重復(fù)使用 — 抗體以共價(jià)方式固定化，且不會被溫和洗脫程序滅活，因此樹脂通?？芍貜?fù)使用數(shù)次
? 便利的樣品處理 — 離心柱（參見尺寸）可消除樹脂損耗并可高效分離溶液
? 全套試劑盒 — 包裝包括細(xì)胞裂解緩沖液和足以進(jìn)行至少 50 次抗體固定和 IP 實(shí)驗(yàn)的試劑和離心柱
? 需要純化抗體 — IP 抗體溶液必須不含 BSA、明膠或其他穩(wěn)定劑蛋白；如需輕松去除這些蛋白，請參見我們的抗體純化試劑盒（產(chǎn)品編號 44600）

應(yīng)用：
?隨后通過電泳和蛋白切除進(jìn)行質(zhì)譜或測序鑒定分析的免疫沉淀；
?對分子量與重鏈或輕鏈抗體片段相似的靶蛋白進(jìn)行的免疫沉淀和 SDS-PAGE 分析
?對通過非變性方法（即，不涉及 SDS-PAGE 的方法）進(jìn)行后續(xù)分析的靶蛋白進(jìn)行的免疫沉淀
?使用未結(jié)合至蛋白 A、蛋白 G 或蛋白 A/G 進(jìn)行的免疫沉淀
?從血清或含免疫球蛋白的其他樣品中進(jìn)行的免疫沉淀

通過兩個(gè)簡單步驟進(jìn)行直接免疫沉淀：

步驟 1：將抗體連接至瓊脂糖樹脂：直接 IP 方法的步是制備 IP 抗體親和樹脂。在含適當(dāng)體積 AminoLink Plus 偶聯(lián)樹脂（醛活化微珠狀瓊脂糖樹脂）的磷酸鹽緩沖液中孵育純抗體（參見產(chǎn)品優(yōu)勢）。在孵育過程中，大抗體分子表面上的各種賴氨酸 ε 胺與樹脂上的醛基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，從而形成席夫堿鍵，然后在存在氰基氫化物的情況下穩(wěn)定為仲胺鍵。固定化反應(yīng)（被稱為還原胺化）是一種非變性反應(yīng)，產(chǎn)生的抗體偶聯(lián)效率通常高于 85%，且抗原結(jié)合功能損失極小。

步驟 2：進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)：制備后，抗體樹脂可以多份平行等份試液或整體形式進(jìn)行 IP 實(shí)驗(yàn)。將抗體樹脂與含有目標(biāo)蛋白抗原的樣品一起孵育，可使抗體:抗原復(fù)合物形成。進(jìn)行洗滌以去除樣品中的非結(jié)合（可能不需要）組分后，通過使用試劑盒中提供的洗脫緩沖液從抗體中解離來回收抗原。在微量離心杯中完成整個(gè)程序，使得短暫離心后溶液與瓊脂糖樹脂分離。只有通過該程序?qū)乖M(jìn)行洗脫，才能在不受抗體片段干擾的情況下識別和進(jìn)一步分析抗原。此外，抗體樹脂可以重復(fù)使用，用于其他輪次的免疫沉淀。

相關(guān)產(chǎn)品
Pierce™ 直接磁性 IP/Co-IP 試劑盒