Thermo Scientific Pierce 直接磁性 IP/Co-IP 試劑盒使用 NHS 化學(xué)將 IP 抗體共價(jià)固定在磁珠上，以實(shí)現(xiàn)有效的免疫沉淀和免疫共沉淀。
磁性 IP 與 NHS 化學(xué)較便利，可實(shí)現(xiàn)從任何種類(lèi)和亞型中固定 IP 抗體，在使用蛋白 A 和蛋白 G 時(shí)觀察到的偶聯(lián)效率方面無(wú)變化。IP 抗體為共價(jià)連接，因此可以洗脫和分析靶蛋白或 co-IP 蛋白復(fù)合物，不會(huì)產(chǎn)生抗體污染。該試劑盒包含優(yōu)化的方案以及使用手動(dòng)磁力架或自動(dòng)平臺(tái)（如 Thermo Scientific KingFisher 儀器）實(shí)現(xiàn)抗體偶聯(lián)和高得率 IP 或 co-IP 所必需的所有緩沖液和試劑。
直接磁性 IP/Co-IP 試劑盒的特點(diǎn)：
•無(wú)抗體 IP—抗體與磁珠不可逆地連接，使得完整抗體或重鏈和輕鏈與純化抗原的共洗脫可忽略不計(jì)
• 快速—在不到 4 小時(shí)完成完整抗體結(jié)合和免疫沉淀
• 便利—IP/co-IP 試劑盒包含磁珠以及所有用于理想免疫沉淀所必需的緩沖液
• 抗體兼容—可與任何抗體種類(lèi)、類(lèi)別或同種型配合使用
• 低非特異性結(jié)合—對(duì)微珠表面進(jìn)行預(yù)封閉，所有未反應(yīng)的 NHS 酯基團(tuán)均被淬滅
• 方案兼容—可手動(dòng)或通過(guò)自動(dòng)化操作（如 Thermo Scientific KingFisher 儀器）進(jìn)行與微珠的蛋白偶聯(lián)及免疫沉淀
• 可擴(kuò)展—僅使用進(jìn)行單次 IP 實(shí)驗(yàn)所需的抗體量或制備更多數(shù)量的抗體磁珠進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)
Pierce 直接 IP/Co-IP 試劑盒方案可通過(guò) NHS 酯化學(xué)將 IP 抗體偶聯(lián)至 Pierce NHS 活化磁珠。然后將抗體結(jié)合微珠與淬滅緩沖液一起孵育，以阻斷剩余的活性 NHS 位點(diǎn)。將制備的抗體結(jié)合微珠與含有目標(biāo)蛋白抗原的細(xì)胞裂解物或組織提取物一起孵育，可以使抗原:抗體復(fù)合物形成。洗滌微珠以去除未結(jié)合的材料，并使用低 pH 值洗脫緩沖液從抗體結(jié)合微珠分離結(jié)合的抗原。包括中和緩沖液，以防止分離抗原沉淀，并確保下游應(yīng)用中的蛋白活性。包含用于制備 SDS-PAGE 分析樣品的泳道標(biāo)志物樣品緩沖液。該方案針對(duì) 2 至 10μg IP 抗體/檢測(cè)進(jìn)行了優(yōu)化。為獲得 co-IP 得率，使用 10μ g 抗體?？墒褂么帕苁謩?dòng)處理或使用 Thermo Scientific KingFisher Flex 等儀器通過(guò)自動(dòng)化操作處理磁珠。
傳統(tǒng) IP（含 蛋白 A/G 磁珠），涉及抗體與蛋白 A/G 的被動(dòng)、非共價(jià)偶聯(lián)，通常可提供比 IP 方案（涉及通過(guò)交聯(lián)或 NHS 酯化學(xué)進(jìn)行的抗體與磁珠共價(jià)結(jié)合）更高的抗原得率。共價(jià)結(jié)合不可避免地會(huì)引起一些功能性抗體結(jié)合位點(diǎn)的損失。為了克服 NHS 化學(xué)的這一限制，可能需要在直接 IP 方法中使用比等效傳統(tǒng) IP 方法更多的 IP 抗體量。通過(guò) IP 抗體與磁珠共價(jià)結(jié)合實(shí)現(xiàn)免疫沉淀的優(yōu)勢(shì)在于這是一種不含干擾抗體條帶的 Western 印跡和凝膠。
相關(guān)產(chǎn)品
Pierce™ 直接 IP 試劑盒
磁性 IP 與 NHS 化學(xué)較便利，可實(shí)現(xiàn)從任何種類(lèi)和亞型中固定 IP 抗體，在使用蛋白 A 和蛋白 G 時(shí)觀察到的偶聯(lián)效率方面無(wú)變化。IP 抗體為共價(jià)連接，因此可以洗脫和分析靶蛋白或 co-IP 蛋白復(fù)合物，不會(huì)產(chǎn)生抗體污染。該試劑盒包含優(yōu)化的方案以及使用手動(dòng)磁力架或自動(dòng)平臺(tái)（如 Thermo Scientific KingFisher 儀器）實(shí)現(xiàn)抗體偶聯(lián)和高得率 IP 或 co-IP 所必需的所有緩沖液和試劑。
直接磁性 IP/Co-IP 試劑盒的特點(diǎn)：
•無(wú)抗體 IP—抗體與磁珠不可逆地連接，使得完整抗體或重鏈和輕鏈與純化抗原的共洗脫可忽略不計(jì)
• 快速—在不到 4 小時(shí)完成完整抗體結(jié)合和免疫沉淀
• 便利—IP/co-IP 試劑盒包含磁珠以及所有用于理想免疫沉淀所必需的緩沖液
• 抗體兼容—可與任何抗體種類(lèi)、類(lèi)別或同種型配合使用
• 低非特異性結(jié)合—對(duì)微珠表面進(jìn)行預(yù)封閉，所有未反應(yīng)的 NHS 酯基團(tuán)均被淬滅
• 方案兼容—可手動(dòng)或通過(guò)自動(dòng)化操作（如 Thermo Scientific KingFisher 儀器）進(jìn)行與微珠的蛋白偶聯(lián)及免疫沉淀
• 可擴(kuò)展—僅使用進(jìn)行單次 IP 實(shí)驗(yàn)所需的抗體量或制備更多數(shù)量的抗體磁珠進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)
Pierce 直接 IP/Co-IP 試劑盒方案可通過(guò) NHS 酯化學(xué)將 IP 抗體偶聯(lián)至 Pierce NHS 活化磁珠。然后將抗體結(jié)合微珠與淬滅緩沖液一起孵育，以阻斷剩余的活性 NHS 位點(diǎn)。將制備的抗體結(jié)合微珠與含有目標(biāo)蛋白抗原的細(xì)胞裂解物或組織提取物一起孵育，可以使抗原:抗體復(fù)合物形成。洗滌微珠以去除未結(jié)合的材料，并使用低 pH 值洗脫緩沖液從抗體結(jié)合微珠分離結(jié)合的抗原。包括中和緩沖液，以防止分離抗原沉淀，并確保下游應(yīng)用中的蛋白活性。包含用于制備 SDS-PAGE 分析樣品的泳道標(biāo)志物樣品緩沖液。該方案針對(duì) 2 至 10μg IP 抗體/檢測(cè)進(jìn)行了優(yōu)化。為獲得 co-IP 得率，使用 10μ g 抗體?？墒褂么帕苁謩?dòng)處理或使用 Thermo Scientific KingFisher Flex 等儀器通過(guò)自動(dòng)化操作處理磁珠。
傳統(tǒng) IP（含 蛋白 A/G 磁珠），涉及抗體與蛋白 A/G 的被動(dòng)、非共價(jià)偶聯(lián)，通常可提供比 IP 方案（涉及通過(guò)交聯(lián)或 NHS 酯化學(xué)進(jìn)行的抗體與磁珠共價(jià)結(jié)合）更高的抗原得率。共價(jià)結(jié)合不可避免地會(huì)引起一些功能性抗體結(jié)合位點(diǎn)的損失。為了克服 NHS 化學(xué)的這一限制，可能需要在直接 IP 方法中使用比等效傳統(tǒng) IP 方法更多的 IP 抗體量。通過(guò) IP 抗體與磁珠共價(jià)結(jié)合實(shí)現(xiàn)免疫沉淀的優(yōu)勢(shì)在于這是一種不含干擾抗體條帶的 Western 印跡和凝膠。
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For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
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