JC-1 (Synonyms: CBIC2)
JC-1 (CBIC2) 是一種廣用于檢測線粒體膜電位的理想熒光探針。JC-1 染料以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內，可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內，JC-1 聚集在線粒體基質中形成聚合物，聚合物發(fā)出強烈的紅色熒光 (Ex=585 nm, Em=590 nm) ；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，產生綠色熒光 (Ex=514 nm, Em=529 nm) 。
生物活性
JC-1 (CBIC2) is an ideal fluorescent probe widely used to detect mitochondrial membrane potential. JC-1 accumulates in mitochondria in a potential dependent manner and can be used to detect the membrane potential of cells, tissues or purified mitochondria. In normal mitochondria, JC-1 aggregates in the mitochondrial matrix to form a polymer, which emits strong red fluorescence (Ex=585nm, Em=590nm); When the mitochondrial membrane potential is low, JC-1 cannot aggregate in the matrix of mitochondria and produce green fluorescence (ex=514nm, em=529nm)[1].
體外研究(In Vitro)
JC-1?染色液的配制
1.1?制備儲存液
用?DMSO?配制?5 mg/mL?的?JC-1。如用?1 mL DMSO?溶解?5 mg JC-1。
注：1) JC-1?儲存液建議分裝后于?-20℃?或?-80℃?避光保存。
1.2?工作液的配制
用預熱好的無血清細胞培養(yǎng)基或?PBS?稀釋儲存液，配制成?1-20 μg/mL?的?JC-1?工作液。
注：1)?請根據(jù)實際情況調整?JC-1?工作液濃度，且現(xiàn)用現(xiàn)配。
2)?如果?JC-1?進入細胞的效果不好，可向工作也液中加入適量?20% Pluronic F127?溶液，終濃度為?0.02-0.05%，Pluronic F127?可以防止?JC-1?在緩沖液中聚合并幫助其進入細胞。
JC-1染色
1)?以6孔板為例進行細胞鋪板，密度為?5×105 cells/mL。37℃，5% CO2?培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注：進行凋亡誘導時的細胞密度建議不超過?1×106/mL，也可根據(jù)自己的細胞類型培養(yǎng)至合適的密度。
2)?取?0.5 mL?細胞懸液至無菌的離心管內。
3) 400 g?離心?3-5 min；棄上清。?
4)?用?1 mL JC-1?工作液重懸細胞，于?37℃，5% CO2?培養(yǎng)箱孵育?15-30 min。
5)?室溫條件?400 g?離心?5 min；吸掉上清。
6)?用?2 mL?細胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞，之后室溫條件?400 g?離心?5 min；棄上清，重復兩次。
7)?用?1 mL?新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞，立刻進行后續(xù)的流式分析或熒光顯微鏡觀察。
8)?數(shù)據(jù)分析?(流式細胞儀)?：含有紅色?JC-1?聚集物的健康細胞線粒體用?FL2?通道檢測；含有綠色?JC-1?單體的凋亡或不健康細胞用?FL1 (FITC)?通道檢測。
注：若用于酶標儀檢測，用?300 μL?緩沖液重懸細胞；然后按照每孔?100 μL?的量將染色好的細胞轉移到不透光的?96?孔板內，即可進行熒光酶標板分析。
分子量：652.23
性狀：Solid
Formula：C25H27Cl4IN4
CAS 號：3520-43-2
運輸條件：Room temperature in continental US; may vary elsewhere.
儲存方式
4°C, sealed storage, away from moisture and light
*In solvent : -80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)
溶解性數(shù)據(jù)
DMSO : 5 mg/mL (7.67 mM; ultrasonic and warming and heat to 60°C)
H2O : < 0.1 mg/mL (insoluble)
| 濃度溶劑體積質量 | 1 mg | 5 mg | 10 mg |
|---|
| 1 mM | 1.5332 mL | 7.6660 mL | 15.3320 mL |
| 5 mM | 0.3066 mL | 1.5332 mL | 3.0664 mL |
| 10 mM | --- | --- | --- |
請根據(jù)產品在不同溶劑中的溶解度選擇合適的溶劑配制儲備液；一旦配成溶液，請分裝保存，避免反復凍融造成的產品失效。
儲備液的保存方式和期限：-80°C, 6 months; -20°C, 1 month (sealed storage, away from moisture and light)。-80°C 儲存時，請在 6 個月內使用，-20°C 儲存時，請在 1 個月內使用。
以下溶解方案都請先按照 In Vitro 方式配制澄清的儲備液，再依次添加助溶劑：
——為保證實驗結果的可靠性，澄清的儲備液可以根據(jù)儲存條件，適當保存；體內實驗的工作液，建議您現(xiàn)用現(xiàn)配，當天使用； 以下溶劑前顯示的百
分比是指該溶劑在您配制終溶液中的體積占比；如在配制過程中出現(xiàn)沉淀、析出現(xiàn)象，可以通過加熱和/或超聲的方式助溶
- 1.
請依序添加每種溶劑： 10% DMSO 40% PEG300 5% Tween-80 45% saline
Solubility: 1.25 mg/mL (1.92 mM); Suspended solution; Need ultrasonic
- 2.
請依序添加每種溶劑： 10% DMSO 90% (20% SBE-β-CD in saline)
Solubility: 1.25 mg/mL (1.92 mM); Suspended solution; Need ultrasonic
參考文獻
[1]. A Perelman, et al. JC-1: alternative excitation wavelengths facilitate mitochondrial membrane potential cytometry. Cell Death Dis. 2012 Nov 22;3:e430. [Content Brief]
[2]. A Perelman, et al. JC-1: alternative excitation wavelengths facilitate mitochondrial membrane potential cytometry. Cell Death Dis. 2012 Nov 22;3:e430. [Content Brief]
[3]. Vera C. Keil, et al. Ratiometric high-resolution imaging of JC-1 fluorescence reveals the subcellular heterogeneity of astrocytic mitochondria. Pflügers Archiv - European Journal of Physiology. 2011,462(5): 693-708. [Content Brief]
[4]. Jung-Ho LEE, et al. Real-time analysis of amyloid fibril formation of α-synuclein using a fibrillation-state-specific fluorescent probe of JC-1. Biochem. J. 2009, 418:311-323.
[5]. Salvioli S, et al. JC-1, but not DiOC6(3) or rhodamine 123, is a reliable fluorescent probe to assess delta psi changes in intact cells: implications for studies on mitochondrial functionality during apoptosis. FEBS Lett. 1997 Jul 7;411(1):77-82. [Content Brief]
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