非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫可視法）使用說(shuō)明書【產(chǎn)品說(shuō)明】本產(chǎn)品基于的恒溫可視化檢測(cè)技術(shù)，可針對(duì)血液、拭子樣本、脾臟等組織樣品中非洲豬瘟病毒的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)顏色變化判讀結(jié)果
非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫可視法）
使用說(shuō)明書
【產(chǎn)品說(shuō)明】
本產(chǎn)品基于的恒溫可視化檢測(cè)技術(shù)，可針對(duì)血液、拭子樣本、脾臟等組織樣品中非洲豬瘟病毒的特異核酸片段進(jìn)行
擴(kuò)增，通過(guò)顏色變化判讀結(jié)果。
【貨 號(hào)】 YRMBV7301
【包裝規(guī)格】 50 Tests/kit
【試劑盒組成】
【儲(chǔ)存條件及有效期】
非洲豬瘟反應(yīng)液 A 可 4℃保存 1 周，超過(guò) 1 周建議-20℃保存，并避免反復(fù)凍融 8 次以上。
樣品前處理液、非洲豬瘟反應(yīng)液 B、非洲豬瘟陰性對(duì)照、非洲豬瘟陽(yáng)性對(duì)照和密封液可 4℃保存一個(gè)月，長(zhǎng)期保存需要-20℃。
避光-20℃貯存，有效期均為 12 個(gè)月。（請(qǐng)于有效期內(nèi)使用）
【適用儀器】
恒溫孵育器（適配 PCR 管）。
【樣品采集】
1． 抗凝血樣品：用真空（EDTA 抗凝的真空）采集 5mL 血液，備用。
2． 血清樣品：采集 5mL 血液樣品，室溫靜置凝固后收集血清，備用。
3． 組織樣品：脾臟，其次為扁桃體、淋巴結(jié)、腎臟、骨髓、肌肉等，剪取 10g 左右樣品，裝入無(wú)菌袋，備用。
4． 樣品：采用商品化拭子采樣管，棉拭子采集樣品后，放入拭子保存管中，備用。
注：樣本如不能馬上檢測(cè)，可短期冷藏（2-8℃）保存，如需運(yùn)輸要冷藏運(yùn)輸。長(zhǎng)期保存需冷凍保存。
【檢測(cè)步驟】
一、DNA 提?。颖局苽鋮^(qū)）
1、全血或血清樣品。直接取 20μL 樣本于 1.5mL 離心管中，加入 100μL 樣品前處理液，混勻，100℃加熱 5 分鐘后，取出立
即 10000rpm 離心 1 分鐘，上清即為樣本模板。
★ 注意：對(duì)于全血樣品，加熱之后需立即離心，否則影響離心分離效果，*終影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2、新鮮組織樣品（如脾臟等）。取 20mg 剪碎的組織樣品于 1.5mL 離心管中，加入 100μL 生理鹽水勻漿。取 20μL 勻漿后的
樣本，加入 100μL 樣品前處理液，混勻，100℃加熱 5 分鐘后，10000rpm 離心 1 分鐘，上清即為樣本模板。
3、拭子樣品（如）。取 20μL 拭子保存液（或者拭子洗滌液）于 1.5mL 離心管中，加入 100μL 樣品前處理液，混勻，
100℃加熱 5 分鐘后，5000rpm 離心 4 分鐘或者 10000rpm 離心 1 分鐘，上清即為樣本模板。
試劑 規(guī)格及數(shù)量 存儲(chǔ)條件
樣品前處理液 1800 μL/管×3 4°C
非洲豬瘟反應(yīng)液 A 50μL/管 -20°C
非洲豬瘟反應(yīng)液 B 1100 μL/管 -20°C
非洲豬瘟陽(yáng)性對(duì)照 100 μL/管 -20°C
非洲豬瘟陰性對(duì)照 100 μL/管 -20°C
密封液 1000 μL/管 -20°C第 2 頁(yè) 共 2 頁(yè)
★ 注意：樣品前處理液使用時(shí)必須吹打均勻，否則影響提取效果。
二、試劑配制
N 個(gè)待檢樣品，則參照下表，按照 N+3 個(gè)數(shù)量計(jì)算各組分用量（N 個(gè)待檢樣品+1 個(gè)陰性對(duì)照+1 個(gè)陽(yáng)性對(duì)照，多配一個(gè)
反應(yīng)確保反應(yīng)液分裝體積的準(zhǔn)確），將反應(yīng)液置于 1.5ml 離心管中，渦旋混勻或者蓋上蓋子上下顛倒混勻 10-20 次，離心 30
秒，每個(gè) PCR 管分裝 23μL，并向每管加入 1 滴密封液（約 20μl）。
試劑 使用量
非洲豬瘟反應(yīng)液 A 1×(N+2)μL
非洲豬瘟反應(yīng)液 B 22×(N+2)μL
反應(yīng)液總體積 23×(N+2)μL
三、添加模板
向 PCR 管中分別加入 2μl 模板，順序?yàn)殛幮詫?duì)照（陰性對(duì)照管可不加入模板）、待測(cè)樣品模板、陽(yáng)性對(duì)照。蓋緊管蓋，
離心 30 秒，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。
四、擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）
恒溫儀器 65℃條件下反應(yīng) 40 min。
【結(jié)果判定】
在一個(gè)光線良好的環(huán)境（手機(jī)拍照開(kāi)手電筒，效果更好）中觀察反應(yīng)液顏色（建議以白紙為背景）。如果溶液顏色仍為紫
色，則判定為非洲豬瘟病毒核酸陰性；如果溶液顏色變成天藍(lán)色，則判定為非洲豬瘟病毒核酸陽(yáng)性，結(jié)果如下。
★ 陰性對(duì)照反應(yīng)管結(jié)果為“陰性”，陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)管結(jié)果為“陽(yáng)性”，此次檢測(cè)結(jié)果有效，否則無(wú)效。如重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為
無(wú)效，請(qǐng)與技術(shù)支持人員聯(lián)系。
【注意事項(xiàng)】
1、本試劑檢測(cè)靈敏度高。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。
1）一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)；2）第二區(qū)：樣本制備區(qū)；第三區(qū)：模板添加區(qū)；第四區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。
★ 分區(qū)之間*進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。
2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨(dú)立使用工具，需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。
3、嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣步驟建議在冰盒上操作。如無(wú)冰盒，配好反應(yīng)后，立即加入樣品進(jìn)行檢測(cè)。
4、反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心 30 秒，并按檢測(cè)
頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。
5、★反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開(kāi)蓋易造成氣溶膠污染，禁止開(kāi)蓋。
6、不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。
7、試劑盒僅用于科研用途。
原創(chuàng)作者：廈門科朋儀器有限公司
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