英文名稱：D-β-homoleucine.HCl
CAS號(hào)：1276055-44-7
別名：(R)-3-Amino-5-methylhexanoic acid hydrochloride
D-beta-homoleucine-HCl
(3R)-3-amino-5-methylhexanoic acid,hydrochloride
分子式：C7H15NO2.HCl
分子量：181.66044
結(jié)構(gòu)圖：
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Kuai 等［33］開發(fā)了一種以合成高密度脂蛋白納米材料為抗原肽( 如SIINFEKL、小鼠結(jié)腸腺癌MC-38 細(xì)胞的Adpgk 基因突變肽) 和佐劑載體的個(gè)體化肽疫苗。疫苗與BMDCs 或JAWSII 細(xì)胞共同孵育，流式細(xì)胞術(shù)-抗原肽-HLA+法或細(xì)胞溶酶體和細(xì)胞核染色的共聚焦顯微鏡法分析DCs 對(duì)抗原肽的遞呈。FITC 標(biāo)記的抗原肽尾基部皮下注射雌性C57BL /6 小鼠，交互式視頻信息系統(tǒng)( interactivevideo information system， IVIS) 分析小鼠腹股溝淋巴結(jié)對(duì)抗原肽的遞呈。抗原融合性BMDCs 與抗原特異性B3Z CD+8 T 細(xì)胞雜交瘤共同孵育，以氯酚紅-β-D-半乳糖苷的吸光度為指標(biāo)，評(píng)價(jià)T 細(xì)胞的活化。疫苗免疫雌性C57BL /6 小鼠，流式細(xì)胞術(shù)-抗原肽-HLA 四聚物+ CD+8α T 細(xì)胞法分析免疫后小鼠外周血中抗原特異性T 細(xì)胞; 同時(shí)將免疫后小鼠脾細(xì)胞與抗原肽共同孵育，ELISPOT-IFN-γ 法分析抗原肽的細(xì)胞免疫原性。疫苗免疫后小鼠脾細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞，MC-38 腫瘤細(xì)胞為靶細(xì)胞，采用乳酸脫氫酶法( lactic dehydrogenase，LDH) 評(píng)價(jià)CTL 的細(xì)胞毒性。疫苗免疫后雌性C57BL /6 小鼠皮下或靜脈注射接種腫瘤細(xì)胞( B16OVA) ，建立免疫預(yù)防性抗腫瘤生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)移模型; 或小鼠皮下注射接種腫瘤細(xì)胞( MC-38 或B16F10) ，再用疫苗免疫小鼠，建立免疫治療性抗腫瘤生長(zhǎng)模型; 以腫瘤體積和腫瘤肺轉(zhuǎn)移數(shù)為指標(biāo)，評(píng)價(jià)疫苗的抗腫瘤作用; 流式細(xì)胞術(shù)-IFN-γ +TNF-α + CD +8α CD +4 T 細(xì)胞法檢測(cè)免疫后小鼠外周血與抗原肽孵育后產(chǎn)生的T 細(xì)胞反應(yīng)和TIL。結(jié)果顯示DCs 可有效遞呈疫苗抗原肽，該疫苗可有效誘導(dǎo)產(chǎn)生T 細(xì)胞反應(yīng)，其誘導(dǎo)產(chǎn)生的新抗原特異性CTL數(shù)量為單獨(dú)可溶性抗原肽疫苗的47 倍; 該疫苗結(jié)合抗PD-1 和抗CTLA-4 可有效抑制體內(nèi)MC-38 和B16F10 腫瘤生長(zhǎng)。
Kinkead 等［34］通過(guò)全外顯子組測(cè)序、RNA 測(cè)序和MHC-肽預(yù)測(cè)性結(jié)合算法( 如NetMHC) 分析鼠Panc02 細(xì)胞系的新抗原，將其制備成肽疫苗( PancVAX)。疫苗后下肢注射免疫雄性C57BL /6 小鼠，分離制備免疫后小鼠脾細(xì)胞來(lái)源的CD +8 T 細(xì)胞，將其與抗原肽融合性T2-Db 或Kb 細(xì)胞共同孵育，ELISPOT-IFN-γ 法和流式細(xì)胞術(shù)-CD3，CD8， IFN-γ，PD-1，顆粒酶B，TNF-α 法評(píng)價(jià)抗原肽的細(xì)胞免疫原性。Panc02 細(xì)胞皮下注射小鼠建立免疫治療性體內(nèi)腫瘤模型，疫苗尾基部皮下注射免疫小鼠，分離制備治療后CD +8 TIL，將其與抗原肽融合性T2-Db 或Kb 細(xì)胞共同孵育，采用ELISPOT-IFN-γ 法和流式細(xì)胞術(shù)-CD3，CD8， IFN-γ，PD-1 法評(píng)價(jià)抗原肽的細(xì)胞免疫原性; 采用Kaplan-Meier 曲線、腫瘤生長(zhǎng)曲線評(píng)價(jià)疫苗抗腫瘤作用，流式細(xì)胞術(shù)-CD3，CD8，T-bet，PD1，Tim3，Lag3 法評(píng)價(jià)TIL 功能。結(jié)果顯示該疫苗可有效激活抗原肽特異性T 細(xì)胞，并可引起小鼠體內(nèi)移植瘤的消退; 其聯(lián)合2 種檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)劑( 抗PD-1 和OX40 抗體) 可引起更強(qiáng)且持久的腫瘤消退并提高生存率［34］。
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