斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)免疫毒性【評(píng)價(jià)原理】
免疫毒性是指化合物對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的損傷作用，包括兩類，一是免疫抑制，即免疫系統(tǒng)的廣泛抑制，可致機(jī)體對(duì)感染的易感性增加及腫瘤發(fā)生率增高；另一是免疫增強(qiáng)，即免疫系統(tǒng)反應(yīng)性過(guò)度增強(qiáng)，可能包括免疫性產(chǎn)生，過(guò)敏反應(yīng)（超敏反應(yīng)）、自身免疫反應(yīng)以及不良免疫刺激等。
斑馬魚(yú)具有先天免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)，與果蠅和線蟲(chóng)模型相比，斑馬魚(yú)的免疫系統(tǒng)發(fā)育的更完整。研究證實(shí)斑馬魚(yú)與哺乳動(dòng)物一樣，具有T細(xì)胞、B細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞，其免疫系統(tǒng)對(duì)于環(huán)境中的免疫毒性物質(zhì)（包括哺乳動(dòng)物）非常的敏感。
免疫毒性指標(biāo)有3個(gè)：（1）應(yīng)用轉(zhuǎn)基因中性粒細(xì)胞綠色熒光斑馬魚(yú)，觀察中性粒細(xì)胞數(shù)量；（2）應(yīng)用轉(zhuǎn)基因巨噬細(xì)胞綠色熒光斑馬魚(yú)，觀察巨噬細(xì)胞數(shù)量（熒光強(qiáng)度）；（3）注射紅色熒光微球，巨噬細(xì)胞吞噬微球排出體外，用體內(nèi)微球的數(shù)量反映巨噬細(xì)胞吞噬功能。（4）檢測(cè)T/B相關(guān)基因（rag1和rag2）表達(dá)。
斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)免疫毒性【實(shí)驗(yàn)方案】
我們將受測(cè)試斑馬魚(yú)分成二組，分別是正常對(duì)照和服用/注射供試品組（供試品通過(guò)溶解到養(yǎng)魚(yú)用水中或注射的方式攝入到斑馬魚(yú)體內(nèi)）。
服用/注射供試品一段時(shí)間后，我們對(duì)斑馬魚(yú)檢測(cè)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)、巨噬細(xì)胞吞噬功能和T/B相關(guān)基因（rag1和rag2）表達(dá)。
【結(jié)果展示】
（1）中性粒細(xì)胞數(shù)量
圖1. 斑馬魚(yú)中性粒細(xì)胞表型圖
綠色小點(diǎn)為中性粒細(xì)胞
可以看到，服用供試品組斑馬魚(yú)體內(nèi)中性粒細(xì)胞數(shù)量比正常對(duì)照組明顯減少。
（2）巨噬細(xì)胞數(shù)量
圖2. 斑馬魚(yú)巨噬細(xì)胞表型圖
可以看到，服用供試品組斑馬魚(yú)體內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量比正常對(duì)照組明顯減少。
（3）巨噬細(xì)胞吞噬功能
圖3. 斑馬魚(yú)巨噬細(xì)胞表型圖
可以看到，服用供試品組的吞噬顆粒的巨噬細(xì)胞數(shù)量與正常對(duì)照組比較有明顯減少，說(shuō)明巨噬細(xì)胞吞噬功能下降。
（4）T/B相關(guān)基因表達(dá)（rag1和rag2）
圖4. 斑馬魚(yú)rag1和rag2表達(dá)
左圖為rag1基因相對(duì)表達(dá)量，右圖為rag2基因相對(duì)表達(dá)量
可以看到，服用供試品組的rag1和rag2相對(duì)表達(dá)量與正常對(duì)照組比較均有減少。
【評(píng)價(jià)結(jié)論】
1.經(jīng)過(guò)每組30尾斑馬魚(yú)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，服用供試品組的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞數(shù)量與正常對(duì)照組比較均有減少，其巨噬細(xì)胞吞噬功能有所下降，且rag1和rag2相對(duì)表達(dá)量減少。
2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了該供試品具有免疫毒性。
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