斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)過(guò)敏反應(yīng)【評(píng)價(jià)原理】

過(guò)敏原/致敏因子誘導(dǎo)組織學(xué)上肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放活性介質(zhì)如組胺、5-HT，前列腺素D、白三烯、血小板活化因子等，表現(xiàn)為平滑肌收縮，毛細(xì)血管擴(kuò)大和通透性增強(qiáng)，腺體分泌物增多等，誘發(fā)多種過(guò)敏癥狀。 類(lèi)胰蛋白酶是肥大細(xì)胞內(nèi)預(yù)先合成的中性蛋白酶，是臨床上檢驗(yàn)人體是否過(guò)敏的重要指標(biāo)。斑馬魚(yú)產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)時(shí)，亦誘導(dǎo)肥大細(xì)胞分泌類(lèi)胰蛋白酶。C48/80作為肥大細(xì)胞活化劑，可以誘導(dǎo)組織學(xué)上肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放類(lèi)胰蛋白酶。

我們檢測(cè)過(guò)敏有兩種方法。1. 類(lèi)胰蛋白酶的含量：用酶標(biāo)儀檢測(cè)類(lèi)胰蛋白酶的含量。2. 肥大細(xì)胞數(shù)量：制作病理切片，經(jīng)過(guò)過(guò)碘酸雪夫染色，肥大細(xì)胞呈藍(lán)色，肥大細(xì)胞釋放的組胺和白三烯等物質(zhì)呈紅色。

斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)過(guò)敏反應(yīng)【實(shí)驗(yàn)方案】

我們將受測(cè)試斑馬魚(yú)分成四組，分別是正常對(duì)照組和滴注致敏劑低、中、高劑量組。其中正常對(duì)照組未滴注C48/80，滴注致敏劑組均滴注C48/80低、中、高劑量（C48/80通過(guò)溶解到養(yǎng)魚(yú)用水中的方式攝入到斑馬魚(yú)體內(nèi)）。

滴注C48/80一段時(shí)間后，利用酶標(biāo)儀檢測(cè)類(lèi)胰蛋白酶含量（吸光度值），同時(shí)制作病理切片進(jìn)行過(guò)碘酸雪夫染色。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚(yú)類(lèi)胰蛋白酶含量（吸光度值）

與正常對(duì)照組比較，*p < 0.05，***p < 0.001

可以看到，滴注中、高濃度致敏劑組類(lèi)胰蛋白酶含量與正常對(duì)照組比較明顯升高。

圖2. 斑馬魚(yú)體內(nèi)肥大細(xì)胞染色典型圖

箭頭指示為肥大細(xì)胞

從病理切片中也能看出來(lái)，滴注致敏劑組斑馬魚(yú)的肥大細(xì)胞與正常對(duì)照組相比數(shù)量明顯上升。

【評(píng)價(jià)結(jié)論】

1.經(jīng)過(guò)每組30尾斑馬魚(yú)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，滴注致敏劑組斑馬魚(yú)類(lèi)胰蛋白酶含量和肥大細(xì)胞數(shù)量與正常對(duì)照組相比數(shù)量明顯上升。

2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了C48/80具有明顯的致敏作用。