斑馬魚模型評價皮膚肌肉毒性【評價原理】

斑馬魚皮膚結(jié)構(gòu)與功能與人類高度相似，斑馬魚皮膚含有基底層、棘層、顆粒層、透明層和表皮角質(zhì)細(xì)胞層；另外尚有與人皮膚結(jié)構(gòu)相同的固有層、半橋粒、黑色素細(xì)胞、血管和皮下脂肪細(xì)胞等。斑馬魚皮膚間質(zhì)結(jié)締組織、膠原及其臨近的纖維母細(xì)胞及皮膚基因表達(dá)亦與人類皮膚相似。

我們評價斑馬魚皮膚肌肉毒性有4個指標(biāo)：1.皮膚刺激；2.肌肉紋理；3.皮膚凋亡細(xì)胞定量；4.皮膚色素變化。

斑馬魚模型評價皮膚肌肉毒性【實(shí)驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成兩組，分別是正常對照組和供試品組（供試品通過溶解到養(yǎng)魚用水中攝入到斑馬魚體內(nèi)）。

皮膚吸收供試品一段時間后，我們通過中性粒轉(zhuǎn)基因熒光斑馬魚，觀察皮膚/肌肉刺激性；通過表型拍照，觀察肌肉紋理及皮膚色素變化；通過AO染色凋亡細(xì)胞，觀察皮膚細(xì)胞凋亡情況。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚皮膚刺激性典型圖片

可以看到，供試品組皮膚/肌肉可見明顯中性粒細(xì)胞聚集。

圖2. 斑馬魚皮膚損傷典型圖片

可以看到，供試品組可見明顯肌肉紋理不清晰。

圖3. 斑馬魚凋亡細(xì)胞表型圖

可以看到，供試品組尾部可見明顯凋亡（綠色熒光亮點(diǎn)）。

圖4. 斑馬魚皮膚色素異常表型圖

可以看到，供試品組軀干可見明顯色素異常（黃色虛線區(qū)域）。

【評價結(jié)論】

1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實(shí)驗，供試品組的斑馬魚皮膚肌肉產(chǎn)生明顯的毒性表型（包括肌肉紋理異常和色素異常），在斑馬魚尾部可見明顯的凋亡細(xì)胞，在軀干部可見明顯的中性粒細(xì)胞聚集。

2.本實(shí)驗證實(shí)了該供試品對斑馬魚有皮膚肌肉毒性。