多肽標(biāo)記和修飾
目前多肽標(biāo)記及修飾的內(nèi)容非常多，廣泛應(yīng)用在多肽藥物，多肽生物學(xué)，多肽抗體以及多肽試劑的研究中。目前應(yīng)用廣泛的有：非放射性核素標(biāo)記（C13，H2，N15），熒光標(biāo)記（FAM，F(xiàn)ITC等），生物素標(biāo)記，磷酸化修飾等。
1. 非放射性核素標(biāo)記
目前在非放射性核素標(biāo)記中，使用廣泛的仍然是C13，H2，因為其使用安全，放射性小?，F(xiàn)在有比較*的非放射性標(biāo)記的氨基酸，可以按照正常的多肽合成方法將標(biāo)記好的氨基酸直接連接到多肽上。
2. 熒光標(biāo)記
熒光標(biāo)記由于沒有放射性，實(shí)驗操作簡單。因此，目前在生物學(xué)研究中熒光標(biāo)記應(yīng)用非常廣泛，熒光標(biāo)記方法與熒光試劑的結(jié)構(gòu)有關(guān)系，對于有游離羧基的采用的方法與接肽反應(yīng)相同，也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。 在N端標(biāo)記FITC的多肽需經(jīng)歷環(huán)化作用來形成熒光素，通常會伴有后一個氨基酸的去除，但當(dāng)有一個間隔器如氨基己酸，或者是通過非酸性環(huán)境將目的肽從樹脂上切下來時，這種情況可避免。
3.生物素標(biāo)記
生物素-親合素系統(tǒng) (biotin-avidin system，BAS)，是70年代后期應(yīng)用于免疫學(xué)，并得到迅速發(fā)展的一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。由于它具有生物素與親合素之間高度親和力及多級放大效應(yīng)，并與熒光素、酶、同位素等免疫標(biāo)記技術(shù)有機(jī)地結(jié)合，使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進(jìn)一步提高。主要有用于標(biāo)記多肽氨基的生物素N-羥基丁二酰亞胺酯(BNHS)和生物素對硝基酚酯(pBNP)，其中以BNHS，當(dāng)然，也可以直接使用生物素也可以標(biāo)記，因為其結(jié)構(gòu)上有個游離的羧基，采用HBTU/HOBt/DIEA方法縮合，由于生物素的溶解度低，使用DMSO/DMF的混合溶劑增加溶解度。
4. 磷酸肽合成
磷酸肽在生命過程中發(fā)揮重要作用，磷酸化的位置在多肽上的Ser，Thr，Tyr。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸，目前使用的都是單芐基磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法，但是目前采用該方法合成磷酸化也有缺點(diǎn)，特別是在合成多磷酸化多肽或長肽的時候，連接效率低，后產(chǎn)品純度很低，對于這種磷酸化多肽，我們考慮采用后磷酸化方法，其合成過程就是在多肽合成結(jié)束后，選擇性脫去要標(biāo)記的氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基，對于Tyr，Thr可以直接使用側(cè)鏈不保護(hù)的氨基酸進(jìn)行反應(yīng)，而Ser可以采用Fmoc-Ser（trt），在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化，采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體，連接到羥基上，隨后在過氧酸下氧化生成磷酰基，完成反應(yīng)。
常用修飾和標(biāo)記
N端標(biāo)記或修飾
N端乙?；ˋC）
N端生物素標(biāo)記（Biotin）
N端脂肪酸修飾(Pal, Myr)
N端羅丹明標(biāo)記(Rodamine B)
N-FITC
N-5-FAM
N-BODIPY FL
N-Merocyanine 540
HYNIC
C端標(biāo)記或修飾
C端酰胺化
C-端生物素標(biāo)記 (用賴氨酸側(cè)鏈連接)
C-FITC (用賴氨酸側(cè)鏈連接)
C-AMC
C-AFC
磷酸化標(biāo)記
p-Tyr
p-Ser
p-Thr
環(huán)化
二硫鍵環(huán)肽（S-S）
多肽首尾酰胺環(huán)
多肽蛋白偶聯(lián)
KLH偶聯(lián)
BSA偶聯(lián)
含特殊氨基酸
D-amino acids
Cit,Aib,Abu,Ahx
Lys(Ac)
Lys(Me), Lys(Me2), Lys(Me3)
MAP 復(fù)合抗原肽
MAP4 4分支
MAP8 8分支
MAP16 16分支

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