大鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-3204  大鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒

　　一、試劑盒簡介

　　本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)技術(shù)，用于定量檢測大鼠血清、血漿或組織勻漿樣本中的組蛋白H2b(histon-H2b)含量。

　　二、試劑盒組成

　　預(yù)包被抗體的96孔微孔板

　　標(biāo)準(zhǔn)品(不同濃度梯度)

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體

　　20×洗滌緩沖液

　　TMB顯色底物

　　終止液

　　封板膜

　　說明書

　　三、儲存條件

　　未開封試劑盒：2-8℃避光保存，有效期6個月

　　已開封試劑盒：

　　標(biāo)準(zhǔn)品、檢測抗體：-20℃保存

　　微孔板：干燥劑密封后-20℃保存

　　其他組分：2-8℃保存

　　使用前所有試劑需平衡至室溫(20-25℃)

　　四、樣本處理

　　1. 血清樣本

　　采集后室溫靜置10-20分鐘

　　2000-3000rpm離心20分鐘

　　小心吸取上清，避免溶血

　　如有沉淀需再次離心

　　2. 血漿樣本

　　使用EDTA或肝素抗凝

　　混合后離心條件同血清

　　避免使用疊氮鈉作為防腐劑

　　3. 組織樣本

　　稱取組織重量后加入PBS(pH7.4)

　　液氮速凍后研磨勻漿

　　離心取上清(建議1:3-1:5稀釋)

　　五、實驗步驟

　　1. 試劑準(zhǔn)備

　　洗滌液配制：將20×濃縮液用蒸餾水按1:19稀釋(1份濃縮液+19份水)

　　2. 加樣

　　取出平衡后的微孔板，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品

　　樣本孔：加入50μL待測樣本

　　空白孔：不加任何試劑

　　3. 溫育

　　每孔加入100μL HRP標(biāo)記檢測抗體

　　封板膜密封，37℃恒溫箱溫育60分鐘

　　4. 洗滌

　　棄去孔內(nèi)液體，吸水紙拍干

　　每孔加入350μL洗滌液，靜置1分鐘

　　重復(fù)洗滌5次(手工或洗板機(jī)操作)

　　5. 顯色

　　每孔加入90μL TMB底物，37℃避光顯色15-20分鐘

　　加入50μL終止液終止反應(yīng)

　　6. 測定

　　450nm波長測定各孔OD值

　　空白孔調(diào)零

　　六、結(jié)果計算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　樣品OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算濃度

　　若樣本OD值超出標(biāo)準(zhǔn)范圍，需用樣本稀釋液稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)

　　七、注意事項

　　所有操作需在生物安全柜中進(jìn)行，廢棄物按傳染性物質(zhì)處理

　　不同批號試劑不可混用

　　顯色液需避光保存

　　封板膜一次性使用

　　實驗前需預(yù)實驗確定樣本稀釋倍數(shù)

　　建議設(shè)置復(fù)孔檢測

　　八、性能指標(biāo)

　　靈敏度：≤0.1 ng/mL

　　檢測范圍：0.3-20 ng/mL

　　批內(nèi)變異系數(shù)：<9%

　　批間變異系數(shù)：<11%

　　回收率：85-115%

　　九、常見問題處理

　　高背景：檢查洗滌是否充分，底物是否污染

　　低信號：確認(rèn)抗體活性，檢查溫育時間

　　異常值：重復(fù)檢測，確認(rèn)樣本處理過程

　　(注：本說明書為通用版本，具體操作請以實際試劑盒附帶說明書為準(zhǔn))

　　注：供科研使用，以上資料供參考，不作為實驗依據(jù)，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌商。

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