使用目的：

　　本試劑盒用于測定植物組織，細(xì)胞及相關(guān)液體樣本中百合斑駁病毒(LMoV)表達(dá)。實驗原理

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中百合斑駁病毒(LMoV)表達(dá)。用純化的百合斑駁病毒(LMoV)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中百合斑駁病毒(LMoV)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的百合斑駁病毒(LMoV)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中百合斑駁病毒(LMoV)的存在與否。

　　試劑盒組成

　　標(biāo)本要求

　　1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能

　　馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

　　2.不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步驟

　　1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照

　　1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)

　　2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不

　　觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育 30分鐘。

　　4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

　　重復(fù)5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同3。

　　8. 洗滌：操作同5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　15分鐘.

　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

　　計算和結(jié)果判定：

　　試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

　　臨界值(CUT OFF)計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

　　陰性判定：樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為百合斑駁病毒(LMoV)陰性

　　陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為百合斑駁病毒(LMoV)陽性　。

　　注意事項

　　1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。

　　2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

　　用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

　　4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　5.底物請避光保存。

　　6.試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

　　7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須

　　注意安全。

　　保存條件及有效期

　　1.試劑盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6個月

　　注：以上資料僅供參考，如需具體品牌試劑盒的完整說明，可咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商的詳細(xì)文檔。