大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-2889大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒

　　一、試劑盒組成與保存條件

　　大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒通常包含以下主要組分：

　　預(yù)包被微孔板(8×12 strips或8×6)

　　TGF-β2標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉，通常濃度為10,000pg/mL)

　　生物素標(biāo)記的檢測抗體(120μL/70μL)

　　HRP標(biāo)記鏈霉親和素(120μL/70μL)

　　TMB顯色液(10mL/6mL)

　　終止液(2M H?SO?，10mL/6mL)

　　洗滌緩沖液(20×濃縮液)

　　樣本稀釋液

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

　　保存條件：未拆封試劑盒應(yīng)4℃保存;拆封后，標(biāo)準(zhǔn)品需-20℃保存，其他組分4℃保存?

　　二、實驗前準(zhǔn)備

　　1. 樣本處理

　　血清?：室溫血液自然凝固10-20分鐘，2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，仔細(xì)收集上清，如出現(xiàn)沉淀應(yīng)再次離心?

　　血漿?：選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后離心(2000-3000轉(zhuǎn)/分，20分鐘)，收集上清?

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：離心去除顆粒后分裝保存于-80℃，避免反復(fù)凍融?

　　組織勻漿?：按重量體積比1:9加入PBS勻漿，離心后取上清?

　　2. 試劑平衡

　　所有試劑及樣本需室溫(18-25℃)平衡30分鐘，避免37℃直接溶解?

　　3. 標(biāo)準(zhǔn)品配制

　　復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品后，用稀釋液梯度稀釋至5,000pg/mL→78pg/mL(7個濃度點)，0pg/mL為空白對照?

　　三、實驗步驟(雙抗體夾心法)

　　加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘?

　　洗滌?：棄液后用PBST洗滌液洗板5次，每次拍干?

　　加檢測抗體?：每孔加100μL生物素化抗體(1:100稀釋)，37℃孵育60分鐘?

　　加酶結(jié)合物?：加入HRP標(biāo)記鏈霉親和素(1:100稀釋)，37℃避光孵育30分鐘?

　　顯色?：加TMB顯色液100μL/孔，避光反應(yīng)15-20分鐘(顯藍(lán)色)?

　　終止與讀數(shù)?：加50μL終止液(變黃色)，10分鐘內(nèi)在450nm波長測OD值(參考波長570-630nm)?

　　四、數(shù)據(jù)分析

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制?：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，擬合四參數(shù)邏輯曲線(R2>0.99)?

　　樣本濃度計算?：根據(jù)樣本OD值從曲線反推濃度，超出范圍需稀釋后重測?

　　質(zhì)量控制?：批內(nèi)CV應(yīng)<10%，批間CV<12%?

　　五、注意事項

　　安全防護(hù)?：

　　避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸盡快用水沖洗?

　　實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品?

　　禁止用嘴吸取試劑盒任何成分?

　　操作要點?：

　　試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫?

　　實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋密封保存?

　　避免細(xì)菌污染、反復(fù)凍融或劇烈震蕩?

　　一次加樣時間控制在10分鐘內(nèi)，樣本多時推薦使用多道移液器?

　　干擾因素?：

　　不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制HRP活性?

　　避免溶血或脂血樣本影響檢測結(jié)果?

　　結(jié)果判讀?：

　　反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)?

　　陰性反應(yīng)為無色或極淺，可用"+"、"-"號表示?

　　也可測OD值：若大于陰性對照OD值的2.1倍即為陽性?

　　六、技術(shù)參數(shù)

　　靈敏度?：通常

　　注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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