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Elisa實(shí)驗(yàn):血漿標(biāo)本的采集與保存
ELISA實(shí)驗(yàn)血漿標(biāo)本采集規(guī)范
抗凝管選擇?:優(yōu)先選?EDTA-K2/EDTA-Na2紫色帽抗凝管?,適配絕大多數(shù)ELISA靶標(biāo)檢測;檢測激素類、小分子物質(zhì)可選肝素鋰綠色帽管;凝血相關(guān)指標(biāo)用檸檬酸鈉藍(lán)色帽管,?絕對不能用含促凝劑的普通血清管?。
采集操作要點(diǎn)?:靜脈采血5-10mL,采血后立即輕輕顛倒試管8-10次,讓抗凝劑與血液充分混勻,嚴(yán)禁劇烈震蕩,避免直接引發(fā)溶血。
即時(shí)離心要求?:采集后?30分鐘內(nèi)?完成離心,設(shè)置2-8℃、1000×g離心15分鐘;若需去除血小板殘留,可二次4℃、3000g離心10分鐘,避免細(xì)胞碎片混入。
上清吸取注意?:小心吸取上層清亮血漿,絕對不能觸碰中間白細(xì)胞層和下層紅細(xì)胞,一旦混入紅細(xì)胞會直接導(dǎo)致后續(xù)檢測背景飆升。
血漿標(biāo)本分級保存方案

關(guān)鍵避坑要點(diǎn)
嚴(yán)重溶血樣本直接棄用:血紅蛋白自帶類過氧化物酶活性,會直接破壞HRP酶活性,引發(fā)全板高背景、假陽性結(jié)果。
高風(fēng)險(xiǎn)樣本加保護(hù)劑:檢測易降解的細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)時(shí),可提前加入蛋白酶抑制劑雞尾酒,抑制樣本中內(nèi)源性蛋白酶對靶標(biāo)的降解。
復(fù)融后預(yù)處理:凍存樣本取出后室溫復(fù)融,再次4℃、1000×g離心5分鐘,取上清再用于實(shí)驗(yàn),避免底部析出的蛋白沉淀干擾讀數(shù)。
禁用NaN?:血漿樣本中絕對不能添加疊氮鈉,它會直接滅活HRP標(biāo)記酶,導(dǎo)致全板無顯色、信號丟失。
注:以上科研產(chǎn)品資料供參考!
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