ELISA試劑盒操作中哪些步驟最容易出錯(cuò)

　　ELISA操作中?洗板、加樣、孵育?是出錯(cuò)率最高的三大步驟，80%以上的實(shí)驗(yàn)異常都源于這幾個(gè)環(huán)節(jié)的細(xì)節(jié)疏漏，具體高頻易錯(cuò)點(diǎn)如下：

　　洗板操作：最容易被忽視的高錯(cuò)誤率環(huán)節(jié)

　　這是全流程中?出錯(cuò)率最高?的步驟，直接決定背景值和結(jié)果重復(fù)性：

　　手工洗板時(shí)洗液量不足、浸泡時(shí)間<30秒、拍干力度不均，會(huì)導(dǎo)致孔內(nèi)殘留未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，直接引發(fā)全板高背景、假陽(yáng)性

　　洗板機(jī)噴頭長(zhǎng)期未沖洗，被洗液結(jié)晶堵塞，部分孔吸液不凈，出現(xiàn)局部孔顯色異常、“花板”現(xiàn)象

　　洗板后拍板時(shí)吸水紙重復(fù)使用，相鄰孔液體交叉污染，直接破壞復(fù)孔重復(fù)性

　　洗滌次數(shù)過(guò)多、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)把已經(jīng)結(jié)合的抗原-抗體復(fù)合物洗脫，導(dǎo)致整體信號(hào)偏低

　　加樣操作：人為誤差最集中的環(huán)節(jié)

　　這是人為操作偏差最容易放大的步驟，直接影響標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣本結(jié)果：

　　移液器長(zhǎng)期未校準(zhǔn)、吸頭安裝不緊、吸液速度過(guò)快產(chǎn)生氣泡，會(huì)導(dǎo)致加樣量偏差超過(guò)5%，復(fù)孔CV值直接超標(biāo)

　　加樣時(shí)槍頭觸碰孔壁、液面，或不同樣本共用槍頭，引發(fā)孔間交叉污染，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果

　　大批量樣本加樣時(shí)長(zhǎng)超過(guò)15分鐘，首尾孔反應(yīng)起始時(shí)間差過(guò)大，導(dǎo)致孔間顯色不均

　　標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋時(shí)不更換槍頭，梯度濃度偏差大，直接導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線R2<0.99，后續(xù)所有樣本定量全部失真

　　孵育操作：最容易引發(fā)系統(tǒng)性偏差的環(huán)節(jié)

　　孵育的溫度、密封性、時(shí)長(zhǎng)偏差，會(huì)帶來(lái)全板系統(tǒng)性的結(jié)果異常：

　　恒溫箱溫度未校準(zhǔn)，實(shí)際溫度與設(shè)定值偏差>2℃，溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加、背景飆升;溫度過(guò)低則抗原抗體結(jié)合不全，整體信號(hào)偏低

　　未貼封板膜或封板膜未貼緊，孔內(nèi)液體蒸發(fā)，邊緣孔濃度異常升高，出現(xiàn)典型的“邊緣效應(yīng)”，外周孔顯色遠(yuǎn)深于中間孔

　　多塊酶標(biāo)板堆疊放置，板間空氣流通差，板內(nèi)溫度分布不均，同一板內(nèi)不同區(qū)域孔的反應(yīng)效率差異巨大

　　其他高頻易錯(cuò)步驟

　　樣本處理?：溶血樣本中血紅蛋白的類(lèi)過(guò)氧化物酶活性會(huì)直接引發(fā)非特異性顯色，樣本反復(fù)凍融超過(guò)3次會(huì)導(dǎo)致靶標(biāo)蛋白降解，結(jié)果直接偏低

　　顯色終止?：TMB底物提前曝光氧化，加入后全板顯色弱;終止液加入后超過(guò)15分鐘才讀數(shù)，數(shù)值持續(xù)漂移失真

　　試劑準(zhǔn)備?：不同品牌/批號(hào)試劑盒的試劑混用，直接破壞反應(yīng)體系，導(dǎo)致全板無(wú)顯色或背景異常

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考!

　　適應(yīng)客戶：醫(yī)院檢驗(yàn)科PCR實(shí)驗(yàn)室，中心實(shí)驗(yàn)室，肝病中心;第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，科研院所，大專(zhuān)院校，制藥廠，試劑生產(chǎn)廠家，疾控中心，檢驗(yàn)檢疫。

　　天津天正信達(dá)供應(yīng)：RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒、提取試劑盒、色譜進(jìn)樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實(shí)驗(yàn)耗材，我司擁有一支覆蓋生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等專(zhuān)業(yè)人員的研發(fā)、構(gòu)建了儀器設(shè)備齊全的實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)，主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機(jī)、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀、高速落地離心機(jī)和qPCR儀等大型儀器設(shè)備。