小鼠血管生長素（ANG）ELISA試劑盒科研使用說明書

天正信達結合你此前關注的ELISA實驗操作、封板膜適配等相關背景，小鼠血管生長素（ANG）ELISA試劑盒的科研使用說明書如下，全程適配常規(guī)96孔板實驗流程，保障ANG蛋白定量結果的準確性：

一、產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品名稱?：小鼠血管生長素（ANG）ELISA檢測試劑盒

產(chǎn)品貨號：BS-2543

檢測原理?：采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗，通過特異性包被抗體捕獲樣本中的ANG蛋白，結合酶標二抗顯色定量

適用樣本?：小鼠血清、血漿、組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清等生物流體

檢測范圍?：常規(guī)規(guī)格為15.6 pg/mL —— 1000 pg/mL，可覆蓋小鼠生理/病理狀態(tài)下的ANG表達水平

用途限制?：僅用于體外科研實驗，不可用于臨床診斷、人體檢測或治療相關場景

儲存條件?：未開封試劑盒2——8℃避光保存，有效期6個月，避免反復凍融

二、實驗前準備

設備耗材?：配備450nm濾光片的酶標儀、單/多通道移液器及對應槍頭、96孔板適配封板膜、Eppendorf梯度稀釋管

試劑預處理?：若濃縮洗滌液低溫析出結晶，置于37℃水浴溫和加熱至溶解，冷卻至室溫后使用

樣本預處理?：血清樣本采集后室溫靜置2小時，3000×g離心15分鐘取上清；細胞培養(yǎng)上清4℃ 1000×g離心20分鐘去除細胞碎片，避免雜質干擾檢測結果

三、標準品配制

將ANG標準品管以10000×g離心1分鐘，使管壁凍干粉沉降至管底

加入1mL樣本稀釋液復溶，得到1000 pg/mL的標準儲備液，室溫放置10分鐘充分混勻

標記7個梯度管，每管預先加入300μL樣本稀釋液，通過倍比稀釋依次得到500、250、125、62.5、31.25、15.6 pg/mL系列濃度標準品，最后一管設為空白對照

四、實驗操作步驟

所有試劑提前從冰箱取出，平衡至室溫（20——25℃），避免低溫導致反應效率偏差

設置標準品孔、待測樣本孔、空白孔，每孔分別加入100μL對應液體，空白孔加入等量樣本稀釋液

貼上適配的封板膜，37℃溫育2小時，長時間孵育推薦使用黑色鋁箔膜保障密封性，避免液體蒸發(fā)

棄去孔內液體，無需洗滌，每孔加入100μL生物素化抗小鼠ANG檢測抗體工作液，貼封板膜37℃溫育1小時

棄去孔內液體，每孔加入300μL洗滌緩沖液，浸泡1——2分鐘后棄液，重復洗板3——5次，最后一次在吸水紙上拍干孔內殘留液體

每孔加入100μL親和素~HRP工作液，貼封板膜37℃溫育30分鐘

重復洗板5次，拍干孔內液體，每孔加入90μL TMB底物溶液，貼封板膜37℃避光顯色10——20分鐘，待標準品孔出現(xiàn)清晰藍色梯度即可終止

每孔加入50μL終止液，輕晃混勻，藍色立即轉為黃色

加入終止液后15分鐘內，用酶標儀在450nm波長下測定各孔OD值

五、結果計算

以標準品ANG濃度為橫坐標，對應OD值為縱坐標，繪制標準曲線，通過回歸方程計算待測樣本中ANG的實際濃度，若樣本稀釋過需乘以對應稀釋倍數(shù)得到最終結果。

六、注意事項

不同批次試劑盒組分不可混用，避免交叉污染影響檢測結果

實驗全程需佩戴無粉手套，避免手上的外源蛋白、酶類污染孔板

若顯色過慢，可適當延長37℃孵育時間，但不可超過30分鐘，避免非特異性顯色升高背景值

洗板時需保證每孔液體排空，殘留洗滌液會直接影響后續(xù)酶促反應效率，導致結果偏差

注：僅用于科研實驗，不可用于診斷或人體相關檢測場景。

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