劉 莉?，徐新剛?， 高 鵬?， 代 龍?

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250014；2.山東省中醫(yī)藥研究所，山東 濟(jì)南250014）

 

關(guān)鍵詞：川芎；超微粉；阿魏酸；鎮(zhèn)痛

摘要：目的：通過(guò)比較川芎超微粉，細(xì)粉及水提物，醇提物和雙提物的體外阿魏酸溶出量及鎮(zhèn)痛作用。

方法：采用槳法體外溶出實(shí)驗(yàn)、薄層掃描法測(cè)定川芎各入藥形式物中阿魏酸的60min體外溶出量，用扭體法及熱板法比較其鎮(zhèn)痛作用。

結(jié)果：各入藥形式物（3g）中阿魏酸的溶出量分別為超微粉（0.645±0.008）mg，細(xì)粉（0.359±0.005）mg,水提物（0.220±0.004）mg ,醇提物（0.526±0.007）mg,雙提物（0.061±0.003）mg；川芎超微粉的鎮(zhèn)痛效果。

結(jié)論：川芎超微粉較細(xì)粉更能增加有效成分的溶出，提高藥效。

中圖分類號(hào)：R284.2     文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A     文章編號(hào)：1001-1528（2002）04-0246-03

 

 

LIU Li?, XU Xin-gang ?, GAO Peng?, DAI Long?

（1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan250014, China；2. Shandong Institute of Traditonal Chinese Medicine, Jinan250014, China）

 

Key words: Chuanxiong；supper-micronized powder ferulic acid； analgesic effect

Abstact: Objective: To compare the dissolution quantities in vitro of ferulic acidthe analgesic effect of Rhizoma Chuanxiong by supper-micronized powder, fine powder, water extraction, alcohol extractiondouble extraction. Methods: Their dissolution rates in vitro were determined by paddle stirring method, the dissolution quantities of ferulic acid in 60 min were determined by TLC-scaning, the analgesic effects were determined by torsionhot-plate methods. Results: The dissolution quantities of ferulic acid were respectively: supper-micronized powder （0.645±0.008） mg，fine powder （0.359±0.005） mg，water extraction （0.220±0.004）mg，alcohol extraction （0.526±0.007） mg，double extraction （0.061±0.003） mg. The analgesic effect of supper-micronized powder of Rhizoma Chuanxiong was the best. Conclusion: The supper-micronized powder of Chuanxiong improved the dissolution quantity of active componentsimproved the potency.

 

川芎為臨床常用中藥，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效，主要用于月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、頭痛、風(fēng)濕痹痛等癥^〔1〕。其成方制劑以治療疼痛癥較多。目前多應(yīng)用全粉入藥或水、醇等提取入藥。為探討其科學(xué)合理的用藥形式，我們通過(guò)體外溶出試驗(yàn)，比較了川芎超微粉、細(xì)粉兩種粉碎工藝及水提、醇提和雙提3種提取工藝中阿魏酸的體外溶出量，并進(jìn)行了鎮(zhèn)痛作用的藥效學(xué)比較試驗(yàn)，結(jié)果超微粉和醇提物阿魏酸的溶出量多，鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)。說(shuō)明川芎的正確入藥形式為：若以全粉入藥，超微粉較細(xì)粉更能增加有效成分的溶出，提高藥效。若要減少劑量用藥，則以川芎醇提物入藥為好。

1.1 儀器

939型薄層自動(dòng)鋪板器（重慶南岸貝爾德儀器技術(shù)廠）；智能溶出試驗(yàn)儀（天津大學(xué)無(wú)線電廠）；CS-9301

薄層掃描儀（日本島津）；82-1型離心機(jī)（上海醫(yī)療器械廠）。

1.2    藥材

川芎藥材購(gòu)自濟(jì)南建聯(lián)中藥店，經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究所生藥室鑒定為傘型科植物川芎Ligus-ticum Chuanxiong Hoort.的干燥根莖。

1.3    試劑

所用試劑均勻?yàn)榉治黾儯话⑽核釋?duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）。

1.4    動(dòng)物

昆明種小鼠，♀♂共用，體重18~22g、24~26g，由山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

2.1 樣品制備

2.1.1 川芎細(xì)粉 將川芎粉碎成全部通過(guò)六號(hào)篩的粉末。

2.1.2川芎微粉 將川芎超微粉碎成中心粒徑10?m以下不少于95%的微粉。

2.1.3 川芎水提物 取川芎藥材粉碎成粗粉。稱取50g，加水煎煮兩次，第1次10倍量水2h，第2次8倍量水1h，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至稠膏，真空干燥，得干膏18.1g。

2.1.4 川芎醇提物 取川芎藥材粉碎成粗粉，稱取50g，加80%乙醇提取2次，每次8倍量，每次2h，濾過(guò)，合并濾液，減壓回收乙醇并濃縮至稠膏，真空干燥，得干膏12.0g。

2.1.5 川芎雙提物 取川芎藥材粉碎成粗粉，稱取50g，加水提取揮發(fā)油至盡，收集揮發(fā)油，提取液濾過(guò)，藥渣加水煎煮1h，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮成稠膏，真空干燥，得干膏20.2g。

2.2    溶出液制備

調(diào)節(jié)溶出儀水浴為37℃恒溫，精密量取1000mL人工胃液置溶出儀的燒杯中，于恒溫水浴中保溫，攪拌轉(zhuǎn)速設(shè)為100r·min^-1。取粉碎樣品，分別精密稱定重量（細(xì)粉、超微粉稱取約3g，提取物稱取相當(dāng)于原藥材3g的干膏量）每組3份，置測(cè)定儀的燒杯中，人工胃液接觸到樣品時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，1h后，取出液體，2000r·min^-1 離心20min。取上清液經(jīng)濾膜過(guò)濾，即得供試溶出液。

2.3    阿魏酸含量測(cè)定

2.3.1 薄層層析及掃描條件 取硅膠G，加0.2%的CMC-Na，自動(dòng)鋪板器鋪成10cm×20 cm×0.03cm的薄層板，105℃活化30min后置干燥器中保存，冷卻后備用。正已烷-氯仿-冰醋酸（8：8：1）展開(kāi)，展距8cm，雙波長(zhǎng)反射式鋸齒掃描，λ_s=328nm， λ_R =370nm，色譜圖見(jiàn)圖1

 

 

 

 

 

2.3.2   標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制   精密稱取阿魏酸對(duì)照品約1mg，以甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中，加甲醇并稀釋至刻度搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密吸取1，2，3，4，5?L點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，按上述條件展開(kāi)，取出、晾干，置紫外光下365nm處檢視，定位，測(cè)定，結(jié)果表明阿魏酸在0.5~2.5?g之間上樣量與斑點(diǎn)峰面積積分值呈線形關(guān)系，回歸方程為Y =1124.68X+273.21，r = 0.9992。

2.3.3   樣品測(cè)定 精密吸取溶出液50mL，乙醚提取3次，每次50mL合并乙醚液，揮干，殘?jiān)眉状既芙猓ㄈ萦?mL量瓶中，作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液10?L，對(duì)照品溶液1?L和5?L點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，依法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。（川芎原藥材中阿魏酸的含量為0.0314%）。

 

 

2.4   川芎不同粉碎度的鎮(zhèn)痛作用

2.4.1 對(duì)0.6%醋酸扭體法的鎮(zhèn)痛作用比較♂小鼠60只，體重24~26g，按體重隨機(jī)分為3組，分別給于各藥物組灌胃，1次/日，連續(xù)3日，對(duì)照組給等體積的蒸餾水灌胃，末次給藥后30min，逐只腹腔注射0.6%醋酸（0.1mL/10g鼠重），觀察注射后出現(xiàn)*次扭體反應(yīng)的時(shí)間及15min內(nèi)的扭體次數(shù)，并進(jìn)行組間統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.2 對(duì)小鼠熱板法鎮(zhèn)痛作用比較 雌性小鼠60只，體重18~20g，實(shí)驗(yàn)前預(yù)篩痛閾，以痛閾值大于5s，小于30s者為合格，而后隨機(jī)分為3組，分別給藥同2.4.1項(xiàng)，按熱板法^〔2〕測(cè)定其痛閾值，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。

動(dòng)物數(shù)   第1次扭體反應(yīng)     15min內(nèi)扭體

組別   

                            （只）    潛伏期（min）       （次數(shù)）

蒸餾水        20      2.51 ±0.45          30.68 ±3.48

川芎超微粉    20      3.97 ±1.52          21.56 ±5.19^2）

川芎細(xì)粉      20      3.08 ±0.57          24.65 ±5.49^1）

川芎水提物    20      2.65 ±0.77          28.72 ±4.21

川芎醇提物    20      2.96 ±0.59          25.23 ±3.76^1）

川芎雙提物    20      2.81 ±1.34          27.54 ±4.53

                      與蒸餾水組比較?P<0.05, ?P<0.01。（下同）

 

組別           動(dòng)物數(shù)（只）          痛閥值（s）

蒸餾水              15                 16.48 ±4.73

川芎超微粉          14                 26.57 ±7.01^2）

川芎細(xì)粉            14                 20.19 ±5.44^1）

川芎水提物          15                 17.21 ±3.54

川芎醇提物          14                 20.11 ±4.12^1）

川芎雙提物          14                 18.65 ±2.47

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，川芎的不同粉碎及提取工藝中，超微粉及醇提物中有效成分阿魏酸的溶出量較高，鎮(zhèn)痛作用也較強(qiáng)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，川芎揮發(fā)油中主要成分藁本內(nèi)酯有拮抗子宮收縮的作用^〔3〕。有機(jī)酸類成分阿魏酸有抗炎和鎮(zhèn)痛作用^〔4〕，但受熱易破壞，在川芎水提和雙提工藝中，因?yàn)楦邷睾烷L(zhǎng)時(shí)間的加熱，阿魏酸大量損失。川芎超微粉因藥材細(xì)胞已破壁，更有利于有效成分的溶出，故川芎超微粉與醇提物阿魏酸的溶出量較多，鎮(zhèn)痛作用也較強(qiáng)。另外，其生物堿川芎嗪可較多的透過(guò)血腦屏障，是藥效成分之一^〔5〕。但此成分極易受熱破壞，經(jīng)過(guò)加熱提取及濃縮過(guò)程已損失殆盡^〔6〕。因沒(méi)有購(gòu)到川芎嗪的對(duì)照品，此部分工作尚需補(bǔ)充。

通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)可以看出，川芎醇提取中阿魏酸的溶出量?jī)H次于超微粉，而鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)也證實(shí)醇提法強(qiáng)于水提法及雙提法，僅次于超微粉及細(xì)粉。綜合考慮，我們認(rèn)為在劑型允許原藥材粉入藥的情況下，如散劑、蜜丸等，川芎的入藥形式以超微粉為好，但若為液體制劑或需減少服用劑量的劑型，如滴丸等，川芎入藥形式還是以醇提物為好。

超微細(xì)粉化技術(shù)近年來(lái)應(yīng)用于中藥的研究報(bào)道逐漸增多，它是利用振動(dòng)對(duì)物料進(jìn)行壓縮式粉碎，可將以傳統(tǒng)粉碎工藝得到的原生藥粉末的粒度從150~200目（75μm以下），提高到中心粒徑5~10μm以下，以達(dá)到細(xì)胞破壁的目的。這種新技術(shù)不僅可以全成分保留活性物質(zhì)，而且可以使藥材中的有效成分直接暴露出來(lái)，從而使藥物吸收更加迅速、*^〔7〕。中藥有效成分的溶出與藥物在體內(nèi)的生物利用度之間存在著一定的相關(guān)性^〔8,9〕。綜合本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，川芎超細(xì)微粉化入藥或進(jìn)行方劑的制劑工藝研究，是相對(duì)合理科學(xué)的。本研究亦為中藥的超細(xì)微粉化研究提供了一個(gè)新的思路。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中華人民共和國(guó)藥典[S]北京：化學(xué)工業(yè)出版社. 一部，2000：30.
[2] 李儀奎.中國(guó)藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海：上海科技出版社.1991：102.

[3] 尾崎幸弘.川芎的藥理和藥效[J].國(guó)外醫(yī)藥·植物藥分冊(cè).1994，9（4）：164

[4] 劉鷹翔.四甲基呲嗪和阿魏酸的抗炎作用[J].國(guó)外醫(yī)藥·植物藥分冊(cè).1993，8（2）：85.

[5] 肖 靜. 川芎嗪藥理研究的新進(jìn)展[J].華西藥學(xué)雜志，1993，8（3）：170.

[6]  北京制藥工業(yè)研究所.川芎有效成分研究：川節(jié)嗪的提取，分離和結(jié)構(gòu)鑒定[J].中華醫(yī)學(xué)雜志.1977，57（8）：420-421.

[7] 徐蓮英，陶建生.中藥制劑發(fā)展的回顧[J].中成藥.2000，22（1）：6.

[8] 劉產(chǎn)明，楊洪元.不同粉碎度三七體外溶出試驗(yàn)[J].中成藥.1998，20（2）：17.

[9] 杜曉敏，劉 璐，何 煜.生藥材超細(xì)微粉制劑的藥效學(xué)研究[J].中草藥.1999，30（9）：680.