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未磷酸化類胰島素生長因子結合蛋白-1檢測試劑盒操作步驟：
1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉.（稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1200 ng/L,800 ng/L ,400 ng/L,200ng/L, 100 ng/L）.
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同）、待測樣品孔.在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）.加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻.
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘.
4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用.
5.洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干.
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外.
7.溫育：操作同3.
8.洗滌：操作同5.
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
10.終止：每孔加終止液50μl,終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）.
11.測定：以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）. 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行.

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