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齊一生物金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1）檢測(cè)試劑盒試劑盒組成及試劑配制
1.         酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）.
2.         標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）.
3.         樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶.
4.         生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶.
5.         辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶.
6.         生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7.         辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8.         底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶.
9.         濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍.
10.     終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）.
10、標(biāo)本的采集及保存
1.         血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃隔夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
2.         血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
3.         細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè).
標(biāo)本的稀釋原則：
首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量,確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù).只有稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍內(nèi),檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的.稀釋的過(guò)程中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄.zui后計(jì)算濃度時(shí),稀釋了“N"倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N".
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制.
如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推.