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纖維素含量測定樣品的前處理-齊一生物

2018-10-22  閱讀(1885)

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纖維素(CLL)含量測定原理:

纖維素為β-葡萄糖殘基組成的多糖,在酸性條件下加熱能分解成β-葡萄糖。β-葡萄糖在強(qiáng)酸作用下,可脫水生成β-糠醛類化合物。β-糠醛類化合物與蒽酮脫水縮合,生成糠醛衍生物。顏色的深淺可間接定量測定纖維素含量。

纖維素含量樣品的前處理:

1、 細(xì)胞壁的提?。喝〖s 0.3g 樣本,加入 1mL 80%乙醇,室溫快速勻漿,95℃水浴  酮各洗一遍(渦旋振蕩 2min 左右,4000g 25℃離心 10min,棄上清即可),沉淀即為粗細(xì)胞壁,加入 1mL 試劑一(去除淀粉)浸泡 15 小時(shí),4000g 25℃離心 10min,棄上清,將沉淀干燥,稱重得細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM)。

2、 纖維素的提?。悍Q取烘干的 CWM 約 5mg,加入 0.5mL 蒸餾水充分勻漿,勻漿液轉(zhuǎn)移至 EP 管中,用蒸餾水定容至 0.5mL,置于冰水浴中,緩慢加入 0.75mL 濃硫酸,混勻,冰水浴中靜置 30min。8000g 4℃離心 10min,取上清液,用蒸餾水稀釋 20 倍后待測。

纖維素含量測定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 620nm,蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。

3、工作液的配制:在試劑二中加入 4mL 試劑三,充分溶解,如較難溶解,可加熱攪拌;用不完的試劑 4℃保存一周;4、

齊一生物主要經(jīng)營進(jìn)口原裝Elisa試劑盒,自產(chǎn)品牌QIYBIO試劑盒。并提供免疫分析相關(guān)試劑及檢測試劑盒。

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