齊一生物科技（上海）有限公司
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僅供研究用
貨號：QYS-235091
土壤*酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說明書
微量法 100 管/48 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
S-CAT 是土壤微生物代謝的重要酶類，在 H2O2 清除系統(tǒng)中具有重要作用。
土壤*酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說明書測定原理：
H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰，通過測定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長下吸光度的變化，即可反應(yīng) S-CAT 活性的高低。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）和蒸餾水
試劑組成和配制：
試劑一：液體 300μL×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 29.7mL 蒸餾水充分溶解后待用；用不完的試劑 4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 1mL 蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存；
試劑三：液體 3mL×1 瓶，4℃保存。
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。
測定步驟：
土壤*酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說明書1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 240nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
試劑名稱 測定管 無基質(zhì)管 無土管
風(fēng)干土樣（g） 0.03 0.03
試劑一（μL） 260 260
雙蒸水（μL） 260
25℃振蕩培養(yǎng) 20min
試劑二（μL） 10 10 10
混勻 8000g，25℃離心 5min，取 180uL 上清
試劑三（μL） 20 20 20
混勻， 240nm 處記錄各管吸光值 A。
注意：每個測定管要設(shè)一個無基質(zhì)管，無土管只要做一管。
S-CAT 活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
單位的定義：每天每 g 風(fēng)干土樣催化 1μmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
計算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A 無土管-A 測定管+A 無基質(zhì)管)×V 反總÷（ε×d）×106]÷W÷T=16.5×（A 無土管-A 測定管+A 無基質(zhì)管）
V 反總：反應(yīng)體系總體積，3×10-4 L；ε：*摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； T：反應(yīng)時間，20 min=1/72d； W：樣本質(zhì)量，0.03g。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
單位的定義：每天每 g 風(fēng)干土樣催化 1μmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
計算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A 無土管-A 測定管+A 無基質(zhì)管)×V 反總÷（ε×d）×106]÷W÷T=33×（A 無土管－A 測定管+A 無基質(zhì)管）
土壤*酶（Solid-Catalase，S-CAT）試劑盒說明書V 反總：反應(yīng)體系總體積，3×10-4 L；ε：*摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d： 96 孔板光徑，0.5cm； T：反應(yīng)時間，20 min=1/72d； W：樣品質(zhì)量，0.03g。
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