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武漢大學(xué)生物醫(yī)學(xué)分析化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室博士生劉安安，在其導(dǎo)師龐代文教授和中國(guó)科學(xué)院武漢病毒所王漢中研究員的共同指導(dǎo)下，利用反向遺傳學(xué)技術(shù)和HaloTag標(biāo)簽蛋白配體多樣性的特性，將衣殼蛋白VP26與HaloTag的融合蛋白特異性地表達(dá)在偽狂犬病毒的衣殼上，實(shí)現(xiàn)了不同熒光配體對(duì)親代和子代偽狂犬病毒衣殼結(jié)構(gòu)分別、定點(diǎn)的標(biāo)記。該策略得到的重組病毒無(wú)需純化和進(jìn)一步的修飾，即可直接用于單病毒示蹤，zui大程度地保持了病毒的完整性及侵染活性。利用基于共聚焦顯微鏡的單病毒示蹤技術(shù)，偽狂犬病毒入胞、在胞內(nèi)沿微管運(yùn)動(dòng)、錨定在細(xì)胞核上釋放核酸、子代病毒衣殼在細(xì)胞核內(nèi)組裝以及從細(xì)胞核釋放到細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)一步組裝等過(guò)程被動(dòng)態(tài)示蹤，實(shí)現(xiàn)了偽狂犬病毒侵染、復(fù)制行為的可視化。通過(guò)分析每個(gè)階段病毒的運(yùn)動(dòng)行為，初步探討了病毒與宿主細(xì)胞的相互作用。此方法結(jié)合龐代文教授課題組建立的量子點(diǎn)標(biāo)記病毒包膜的策略，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒包膜和衣殼的同時(shí)標(biāo)記，有望對(duì)病毒侵染宿主細(xì)胞的機(jī)理進(jìn)行更深入的研究。
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