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研究利用反向遺傳學技術和HaloTag標簽蛋白配體多樣性特性

2016-3-22  閱讀(1732)

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武漢大學生物醫(yī)學分析化學教育部重點實驗室博士生劉安安,在其導師龐代文教授和中國科學院武漢病毒所王漢中研究員的共同指導下,利用反向遺傳學技術和HaloTag標簽蛋白配體多樣性的特性,將衣殼蛋白VP26HaloTag的融合蛋白特異性地表達在偽狂犬病毒的衣殼上,實現(xiàn)了不同熒光配體對親代和子代偽狂犬病毒衣殼結(jié)構(gòu)分別、定點的標記。該策略得到的重組病毒無需純化和進一步的修飾,即可直接用于單病毒示蹤,zui大程度地保持了病毒的完整性及侵染活性。利用基于共聚焦顯微鏡的單病毒示蹤技術,偽狂犬病毒入胞、在胞內(nèi)沿微管運動、錨定在細胞核上釋放核酸、子代病毒衣殼在細胞核內(nèi)組裝以及從細胞核釋放到細胞質(zhì)中進一步組裝等過程被動態(tài)示蹤,實現(xiàn)了偽狂犬病毒侵染、復制行為的可視化。通過分析每個階段病毒的運動行為,初步探討了病毒與宿主細胞的相互作用。此方法結(jié)合龐代文教授課題組建立的量子點標記病毒包膜的策略,可以實現(xiàn)對病毒包膜和衣殼的同時標記,有望對病毒侵染宿主細胞的機理進行更深入的研究。

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