齊一生物科技（上海）有限公司
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一、使用方法
1、樣本處理
血清/血漿：采集后需室溫靜置1小時，隨后4℃離心(1000-3500g×15-20分鐘)，取上清液檢測；若需保存，應(yīng)置于-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。
組織勻漿：稱取0.1g組織，加入提取液(如PBS)勻漿后離心(5000-8000g×5-10分鐘)，取上清液待測；推薦添加蛋白酶抑制劑以提高樣本穩(wěn)定性。
細(xì)胞培養(yǎng)物：直接離心(1000g×20分鐘)后取上清，保存條件同血清樣本。
2、試劑準(zhǔn)備
試劑需室溫平衡20分鐘，部分試劑(如緩沖液、酶標(biāo)試劑)需37℃預(yù)熱30分鐘以上。
濃縮洗滌液需按比例稀釋(如1:20)，并確保結(jié)晶完全溶解后使用。
3、檢測步驟
分光光度法：
預(yù)熱分光光度計至指定波長(如340nm或550nm)，用蒸餾水或無水乙醇調(diào)零。
按順序加入底物、樣本及反應(yīng)試劑，啟動酶促反應(yīng)；間隔記錄吸光度值，直至反應(yīng)結(jié)束。
ELISA法：
將樣本加入預(yù)包被抗體的微孔板，孵育后洗滌；加入酶標(biāo)二抗及顯色底物(如TMB)，終止反應(yīng)后測定OD值。
4、結(jié)果計算
通過標(biāo)準(zhǔn)曲線(濃度梯度為0-800μmol/L)計算樣本中脂肪酸含量，需注意部分試劑盒需乘以稀釋倍數(shù)(如5倍)。
二、注意事項
1、樣本處理
避免使用含NaN3或強(qiáng)酸堿的樣本，以防抑制酶活性或干擾反應(yīng)。
組織樣本需充分勻漿并去除殘留血液，防止溶血影響檢測結(jié)果。
2、試劑管理
未使用的試劑條需密封保存于2-8℃，避免受潮或污染。
標(biāo)準(zhǔn)品及顯色底物需避光保存，臨用前配制。
3、操作規(guī)范
實(shí)驗(yàn)全程需佩戴手套，避免直接接觸有毒試劑；廢棄物需按生物危害物處理。
微量移液器吸頭不可混用，防止交叉污染。
4、洗滌控制
洗滌時需徹底甩干孔內(nèi)液體，避免殘留液體干擾吸光度測定；推薦使用洗板機(jī)以提高一致性。
5、環(huán)境與儀器
避免在含次氯酸鈉、乙醚等腐蝕性氣體的環(huán)境中操作。
分光光度計或酶標(biāo)儀需定期校準(zhǔn)，確保波長精度和穩(wěn)定性。
6、質(zhì)量控制
每批次實(shí)驗(yàn)需同步檢測標(biāo)準(zhǔn)品和陰性對照(如S0號標(biāo)準(zhǔn)品)，以驗(yàn)證試劑盒靈敏度和特異性。
以上方法及注意事項綜合了酶法、ELISA法及分光光度法的通用流程，具體操作請以試劑盒說明書為準(zhǔn)。
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