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聯(lián)人:
游經(jīng)理
址:
上海市閔行區(qū)莘建東路158號(hào)綠海大廈B座8F
編:
200110
鋪:
http://m.jjhengye.com/st31116/
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多肽的保存使用說(shuō)明

2013-1-10 

  多肽的保存使用說(shuō)明
  
  多肽是α-氨基酸以肽鏈連接在一起而形成的化合物,它也是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物。由兩個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,同理類推還有三肽、四肽、五肽等。通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽。它們的分子量低于10,000Da(Dalton道爾頓),能透過(guò)半透膜,不被三及硫酸銨所沉淀。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽;由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì)。
  
  特點(diǎn)
  
  傳統(tǒng)獲得肽的方法有很多。傳統(tǒng)法主要有:酸法、堿法、電法、人工嫁接法、基因表達(dá)法等。但在工藝技術(shù)方面,這些合成工藝方法的局限性,是導(dǎo)致其這些合成方法沒(méi)有產(chǎn)品的原因。
  
  多肽保存:
  
  大多肽在-20℃很穩(wěn)定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,在將它們暴露于空氣之前,冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少,當(dāng)無(wú)法冷凍干燥時(shí),的方法是以小的工作樣量存放。
  
  對(duì)于含Cys,MetorTrP的多肽,脫氧緩沖劑對(duì)其溶解*,因?yàn)檫@種多肽可易空氣氧化,在封瓶前,慢慢流過(guò)多肽的氮?dú)饣驓鍤庖矔?huì)降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有這些肽與不含這些有問(wèn)題解苷的那些肽相比,生命期有限。
  
  溶解性:
  
  大多肽的道選溶劑是超純抽氣水。人C多肽試劑盒稀乙酸或氨水分別對(duì)于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽,需要DMF、脲、guanidiniamchloride或acetonitnle來(lái)溶解,這些溶劑可能某些實(shí)驗(yàn)有副作用。所以我們建議設(shè)計(jì)多肽時(shí)要加注意。
  
  殘基Ala,Cys,Ile,Leu,Met,Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。
  
  您需要特殊的多肽或任何技術(shù)幫助,請(qǐng)隨時(shí)與我們。我們包你*滿意,對(duì)于我們不能適當(dāng)合成的順序,我們不收費(fèi)。
  
  多肽的保存和操做
  
  包裝1mg或更少的多肽按凈重包裝,聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水。例如,氨基酸分析決定的肽含量是80%,在1mg樣品中,那么瓶中毛重是1.25mg。
  
  大量的多肽以毛重算。標(biāo)出的重量含相關(guān)抗離子和水,例如,25mg樣品中肽百分比為90%,那么,實(shí)際肽量為25mg×90%=22.5mg
  
  不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%,而肽含量相關(guān)帶電基團(tuán)(如Arg,Lys)的抗離子量和肽新水性決定。這是合成肽的本身特性。
  
  凍干肽的保存
  
  所有產(chǎn)品應(yīng)存于冰箱,為-20℃。多數(shù)肽以此方法可以存放幾年不變。
  
  肽溶液的保存
  
  溶液肽遠(yuǎn)比凍干形式不穩(wěn)定,溶液應(yīng)為中性pH(pH5-7),-20℃保存的,為避免樣品的反復(fù)凍融,分成小樣存放。一份樣品融凍后未用完,應(yīng)扔掉,細(xì)菌降解有時(shí)會(huì)成為溶液肽的麻煩,為克服此,肽應(yīng)溶于無(wú)菌水,或肽溶液用0.2μM濾膜過(guò)濾。
  
  多肽的重建和操作
  
  多數(shù)肽溶于無(wú)菌蒸溜水。初次溶解時(shí),要注意使初始濃度比要求濃度大,如果多肽僅有限溶解性,這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽。
  
  如果多肽在水中的溶解性有限,有幾種選擇可幫助溶解:
  
  對(duì)堿性肽用稀乙酸(含Arg,Lys,His)
  
  酸性肽用稀氨水(含Asp,Glu)
  
  對(duì)極疏水的肽用10%有機(jī)修飾物(Acetonitnile,Methanol)
  
  極不溶的肽用DM50或DMF
  
  guaniclinehydrochloride或脲的濃溶液也很有用,人多肽YY(Peptide-YY)ELISA試劑盒與上述方法合用,聲處理也是溶解多肽的有效手段。
  
  多肽的包裝
  
  目錄中所有多肽除特別說(shuō)明外,純度為95~98%。包裝為小瓶?jī)龈煞?。除特別注明外,多肽凈重包裝,例如,1mg瓶的β-amyloid1-40含1mg的多肽。多肽凈重由氨基酸分析得到的肽含量計(jì)算。例如,一個(gè)多肽樣品毛重5mg,氨基酸含量85%,多肽凈重為5mg×0.85=4.25mg。請(qǐng)注意,多肽含量不是多肽純度,與抗離子象乙酸鹽和溶劑,特別是水結(jié)合量合成多肽的本身特性。多肽純度可能達(dá)100%,但合成品中多肽含量由氨基酸組成,硫水性,和多肽對(duì)溶劑和離子的暴露決定,特別是在純化過(guò)程中,無(wú)論多肽如何純,凍干粉多肽含量一般為70-85%。剩余15-30%由其它基本非肽成份構(gòu)成。
  
  多肽應(yīng)用和保存
  
  多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問(wèn)題是形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。除了zui太肽外,這點(diǎn)都會(huì)發(fā)生,在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會(huì)促進(jìn)二級(jí)結(jié)構(gòu)形成。我們建議先在無(wú)菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率,可用聲處理。溶解仍有問(wèn)題,加少量稀乙酸(10%)或氨水,會(huì)便于溶解。
  
  要長(zhǎng)期保存多肽,冷凍干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無(wú)降解。溶液中的多肽遠(yuǎn)不穩(wěn)定。多肽易受細(xì)菌降解,應(yīng)用無(wú)菌純化水溶解。
  
  含有Met,Cgs或Try殘基的多肽溶液由于氧化,壽命有限。應(yīng)溶于無(wú)氧溶劑,為防止重復(fù)凍融的破壞,建議溶解過(guò)量的肽的便實(shí)驗(yàn),其余多肽以固體形成保存。
  
  固相多肽合成Fmoc方法
  
  任何多肽鏈的關(guān)鍵連接為肽鍵,由一個(gè)氨基酸的氨基與另氨基酸的縮合形成。通常一個(gè)氨基酸由一個(gè)中心碳原子組成,它由四個(gè)基它基團(tuán)包圍:氨基、羰基、基和側(cè)鏈。側(cè)鏈,稱為R,區(qū)別不同氨基酸的結(jié)構(gòu)。某些側(cè)鏈含有干擾肽鍵形成的功能團(tuán)。因此側(cè)鏈功能團(tuán)的封閉很重要。
  
  圖工顯示了Fmoc合成的一般流程,首先*個(gè)Fmoc氨基酸通過(guò)一個(gè)酸性接頭接到不溶載體樹脂上,F(xiàn)moc去保護(hù)通過(guò)用堿處理樹脂來(lái)完成,一般是Poperidine。用預(yù)先激活或原位激活連接第二個(gè)Fmoc氨基酸。要求總多肽合成后,通過(guò)TFA分離來(lái)除去樹脂和去保護(hù)。
  
  Fmoc分離
  
  固相多肽合成中多肽分離主要用酸解
  
  Fmoc法用弱酸,比如TFA或TMSBr。各種添加劑,一般為thiolcompound,水和酚,用來(lái)保護(hù)多肽的免分離中Carbocation的破壞。


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